研究背景藥物性肝損傷（drug-induced liver injury,DILI）正越來越成為影響公眾健康和藥物開發(fā)的嚴(yán)重問題。臨床前藥物安全性評估旨在最大限度地避免對人體健康的潛在風(fēng)險(xiǎn),同時降低藥物研發(fā)成本。然而,由于存在種屬差異,常規(guī)的臨床前動物安全性評價實(shí)驗(yàn)與人體DILI存在較差的相關(guān)性。基于人源性細(xì)胞的體外肝毒性預(yù)測系統(tǒng)的發(fā)展,有助于解決動物實(shí)驗(yàn)帶來的種屬差異問題,并且體外試驗(yàn)周期短,能夠?qū)崿F(xiàn)高通量檢測,并能探究藥物致肝毒性的機(jī)制信息。但使用任何單一的檢測終點(diǎn)已被證實(shí)均無法準(zhǔn)確預(yù)測人體DILI,因此,以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外多參數(shù)組合預(yù)測人體DILI,成為新藥開發(fā)早期肝毒性篩選的研究趨勢。有研究表明,以ROS/ATP的比值作為終點(diǎn)用于檢測藥物的肝毒性,結(jié)果具有很高的敏感性和特異性。與傳統(tǒng)的單一終點(diǎn)評價藥物毒性相比,這種復(fù)合型終點(diǎn)考慮了藥物的多機(jī)制毒性作用,提高了預(yù)測的準(zhǔn)確性;與現(xiàn)有的多終點(diǎn)組合預(yù)測系統(tǒng)相比,比值型終點(diǎn)簡化了實(shí)驗(yàn)程序,有助于體外肝毒性的標(biāo)準(zhǔn)化預(yù)測,這對于新藥開發(fā)早期候選化合物的大規(guī)模篩選具有重要意義。因此,這種復(fù)合比值型終點(diǎn)為體外肝毒性的標(biāo)準(zhǔn)化預(yù)測提供了新思路,具有較... 

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫說明對照表
第1章 緒論
    1.1 藥物性肝損傷
    1.2 臨床前藥物肝毒性研究面臨的挑戰(zhàn)
    1.3 體外肝毒性評價研究進(jìn)展
        1.3.1 藥物性肝損傷的主要機(jī)制
        1.3.2 體外肝毒性評價終點(diǎn)
        1.3.3 體外肝毒性評價模型
    1.4 立題依據(jù)
        1.4.1 立題背景
        1.4.2 本課題的研究前提
        1.4.3 細(xì)胞模型選擇依據(jù)
        1.4.4 數(shù)據(jù)分析方法選擇依據(jù)
第2章 8個候選藥物對HepG2細(xì)胞活力的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑/試劑盒
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 待測藥物
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 待測藥物的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞活力檢測
        2.2.3 數(shù)據(jù)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 4個嚴(yán)重肝毒性藥物對HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.2 3個中度肝毒性藥物對HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.3 無肝毒性藥物地塞米松對HepG2細(xì)胞存活率的影響
        2.3.4 不同程度肝毒性藥物對HepG2細(xì)胞存活率的影響
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 基于HepG2細(xì)胞的多參數(shù)肝毒性檢測系統(tǒng)的建立
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑/試劑盒
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 待測藥物
        3.1.5 主要試劑的配制
        3.1.6 藥物的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 ROS含量檢測
        3.2.3 ATP含量檢測
        3.2.4 caspase3/7含量檢測
        3.2.5 GSH含量檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 兩種方法檢測ROS結(jié)果的比較
        3.3.2 用熒光酶標(biāo)儀檢測鹽酸胺碘酮對HepG2細(xì)胞不同終點(diǎn)的影響
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 基于HepG2細(xì)胞的多參數(shù)檢測系統(tǒng)用于肝毒性篩選
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑/試劑盒
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 待測藥物
        4.1.5 主要試劑的配制
        4.1.6 待測藥物的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 ROS含量檢測
        4.2.3 ATP含量檢測
        4.2.4 caspase3/7含量檢測
        4.2.5 GSH含量檢測
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 27個藥物的ROS檢測結(jié)果
        4.3.2 27個藥物的ATP檢測結(jié)果
        4.3.3 27個藥物的caspase檢測結(jié)果
        4.3.4 27個藥物的GSH檢測結(jié)果
        4.3.5 27個藥物的ROS/ATP檢測結(jié)果
        4.3.6 27個藥物的caspase/ATP檢測結(jié)果
        4.3.7 27個藥物的GSH/ATP檢測結(jié)果
        4.3.8 ROS、ATP、caspase及GSH預(yù)測DILI的能力比較
        4.3.9 ATP、ROS/ATP、caspase/ATP及GSH/ATP預(yù)測DILI的能力比較
        4.3.10 ROS/ATP預(yù)測DILI的性能
        4.3.11 ROS/ATP區(qū)分不同臨床表型肝毒性藥物的性能
    4.4 討論
        4.4.1 27個藥物對HepG2細(xì)胞不同檢測終點(diǎn)的影響
        4.4.2 ROS/ATP可用于區(qū)分具有不同程度肝毒性的藥物
        4.4.3 本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)與其他檢測系統(tǒng)相比具有優(yōu)越的評估性能
        4.4.4 影響本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)預(yù)測的因素
    4.5 本章小結(jié)
第5章 ROS/ATP的比值在hiPSCs分化的肝細(xì)胞的肝毒性檢測中的應(yīng)用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.1.2 主要試劑/試劑盒
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.4 待測藥物
        5.1.5 主要試劑的配制
        5.1.6 待測藥物的配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 ROS含量檢測
        5.2.2 ATP含量檢測
        5.2.3 數(shù)據(jù)處理
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 不同來源的hiPSC-HLCs的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
        5.3.2 候選藥物對NovoCell~(TM)-Hepatocytes的影響
        5.3.3 候選藥物對IxCell~(TM)-Hepatocytes的影響
        5.3.4 不同細(xì)胞模型比較
    5.4 討論
        5.4.1 待測藥物的肝毒性及檢測結(jié)果
        5.4.2 hiPSC-HLCs可能有助于提高ROS/ATP檢測的靈敏度
        5.4.3 hiPSC-HLCs的定向分化及面臨的挑戰(zhàn)
    5.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新性分析
對進(jìn)一步研究工作的設(shè)想和建議
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3672210