本文關(guān)鍵詞：血小板氧化破碎機(jī)制分子靶點(diǎn)的篩選及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：艾滋病病毒／丙型肝炎病毒免疫相關(guān)性血小板減少癥病人(HIV-1/HCV-ITP)的血液中存在一種特殊的抗血小板自身抗體,它與血小板整合素GPIIIa49-66表位結(jié)合后,可激活血小板內(nèi)NADPH氧化酶,產(chǎn)生反應(yīng)性氧自由基(ROS),啟動(dòng)補(bǔ)體-非依賴性血小板氧化破碎這一血小板死亡途徑,但是不同病人血液中的這種自身抗體對(duì)于血小板的氧化破碎效果并不相同,GPIIIa49-66序列由三個(gè)表位組成,分別為GPⅢa49-57 (CAPESIEFP), GPⅢa57-64 (PVSEARVL),和GPIIIa59-66 (SEARVLED),具體是哪個(gè)表位對(duì)于血小板的氧化破碎起關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用目前尚不清楚。針對(duì)這一問(wèn)題,在本研究中,我們通過(guò)雜交瘤技術(shù)經(jīng)過(guò)動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞的篩選及鑒定、單克隆抗體的純化等步驟制備出一系列針對(duì)于GPⅢa49-66三個(gè)不同表位的鼠源性單克隆抗體,并且所有抗體均可與人血小板結(jié)合,在這些抗體中IE7和5A10可與表位GPⅢa49-57 (CAPESIEFP,命名為P1)結(jié)合,1C1和1E5可與表位GPⅢa57-64 (PVSEARVL,命名為P2)結(jié)合,4D5和5F8可與表位GPⅢa59-66 (SEARVLED,命名為P3)結(jié)合,這些抗體分別與人血小板進(jìn)行孵育,結(jié)果顯示,針對(duì)于P1表位的單克隆抗體對(duì)血小板的氧化破碎效果高于對(duì)照組5-6倍。然而,針對(duì)于P2和P3表位的單克隆抗體對(duì)血小板的氧化破碎效果僅高于對(duì)照組低于2倍。因此,該結(jié)果提示,血小板表面整合素GPⅢa49-57 (CAPESIEFP)表位可能對(duì)于血小板氧化破碎起關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用,這一具體的分子靶向研究結(jié)果對(duì)于臨床上如何溶解已經(jīng)形成的動(dòng)脈血栓團(tuán)塊將具有一定的借鑒意義。
【關(guān)鍵詞】：免疫學(xué) 血小板減少癥 GPⅢa49-66 血小板氧化破碎 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略詞10-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料及方法15-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備15-22
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器15-17
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材17-18
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑18-21
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞來(lái)源21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 2.2.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位單克隆抗體的制備22-28
• 2.2.2 HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)28
• 2.2.3 考馬斯亮藍(lán)染色28
• 2.2.4 Western blotting篩選陽(yáng)性克隆28-29
• 2.2.5 ELISA分析抗體效價(jià)29-30
• 2.2.6 流式細(xì)胞儀工作原理30
• 2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)單克隆抗體與血小板結(jié)合性30-31
• 2.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)單克隆抗體對(duì)血小板氧化破碎效果31
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-41
• 3.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位單克隆抗體的產(chǎn)生31-33
• 3.2 不同的單克隆抗體可以與GPⅢa49-66不同區(qū)域結(jié)合33-34
• 3.3 純化后的單克隆抗體與人血小板的結(jié)合性34-37
• 3.4 不同抗體對(duì)人血小板氧化破碎效果37-39
• 3.5 不同抗體對(duì)小鼠血小板氧化破碎效果39-41
• 第四章 討論41-43
• 第五章 附錄43-46
• 5.1 常用實(shí)驗(yàn)試劑的配制43-45
• 5.2 本人文章發(fā)表45-46
• 附件46-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 致謝54-55

【相似文獻(xiàn)】

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