目的獲得1種能夠增加人成骨細胞堿性磷酸酶生成量的金槍魚骨膠原蛋白肽螯合鈣（collagen peptide from tuna bone chelated calcium, TCP-Ca）的工藝方法。方法利用正交實驗優(yōu)化蛋白酶酶解法制備金槍魚骨膠原蛋白肽的工藝,利用正交實驗優(yōu)化金槍魚骨膠原蛋白肽和檸檬酸鈣進行螯合反應的工藝,然后利用傅里葉變換紅外光譜對TCP-Ca進行定性分析,同時檢測TCP-Ca對MG-63細胞堿性磷酸酶生成量的影響。結果金槍魚骨膠原蛋白肽制備的最佳工藝為pH 9.0、酶解時間180 min、加酶量5 000 U/g、酶解溫度45℃;TCP-Ca制備的最佳工藝為溫度35℃、pH 7.5、肽鈣質量比6∶1、時間40 min;金槍魚骨膠原蛋白肽的氨基和羥基均參與了鈣螯合反應;TCP-Ca比金槍魚骨膠原蛋白肽更有利于增加MG-63細胞分泌堿性磷酸酶。結論本文優(yōu)化了TCP-Ca的制備工藝,發(fā)現(xiàn)其具有增加成骨細胞分泌堿性磷酸酶的生物活性。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 金槍魚骨和實驗細胞
    1.2 實驗試劑
    1.3 實驗儀器
    1.4 方法
        1.4.1 酶解反應制備TCP
        1.4.2 MG-63細胞ALP檢測
        1.4.3 酶解反應條件優(yōu)化
            (1)酶解溫度對ALP增長率的影響
            (2)酶解時間對ALP增長率的影響
            (3)酶解pH對ALP增長率的影響
            (4)加酶量對ALP增長率的影響
            (5)酶解反應獲取TCP正交實驗方法
        1.4.4 金槍魚骨膠原蛋白肽氨基酸分析
        1.4.5 金槍魚骨膠原蛋白肽螯合鈣制備及工藝優(yōu)化
            (1)肽鈣質量比對螯合率的影響
            (2)pH對螯合率的影響
            (3)溫度對螯合率的影響
            (4)時間對螯合率的影響
            (5)螯合反應正交實驗方法
        1.4.6 傅里葉變換紅外光譜分析
        1.4.7 金槍魚骨膠原蛋白肽螯合鈣對MG-63細胞的影響
    1.5 數(shù)據統(tǒng)計處理
2 結果與分析
    2.1 酶制劑的選擇
    2.2 金槍魚骨酶解反應單因素實驗分析
    2.3 金槍魚骨酶解反應正交實驗分析
    2.4 TCP氨基酸分析
    2.5 TCP螯合鈣制備單因素實驗分析
    2.6 TCP螯合鈣制備正交實驗分析
    2.7 紅外光譜表征TCP螯合鈣
    2.8 TCP螯合鈣對MG-63細胞ALP增長率的影響
3 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]羅非魚皮膠原蛋白小肽螯合鈣的制備、鑒定及抗氧化研究[J]. 夏光華,申鉉日,酒志強.  食品科技. 2013(06)
[2]金槍魚骨營養(yǎng)成分分析[J]. 賈建萍,周彥鋼,林賽君,魯健章,鄭高利.  食品工業(yè)科技. 2013(10)

碩士論文
[1]金槍魚罐頭的研制及其副產物利用技術研究[D]. 胡靜.海南大學 2015
[2]鱘魚皮膠原蛋白肽的制備、純化工藝及理化性質研究[D]. 劉培勇.武漢工業(yè)學院 2012
[3]牛骨膠原多肽螯合鈣的制備及其結構表征[D]. 付文雯.華中農業(yè)大學 2010



本文編號：3647054