在長期藥物篩選的實(shí)踐中,常用的動物篩選模型雖然可以直觀的反應(yīng)藥物療效與不良反應(yīng)。但由于動物樣本的特殊性,導(dǎo)致動物模型在藥物篩選過程中暴露出效率低、成本高等缺點(diǎn)。傳統(tǒng)的細(xì)胞篩選模型雖然有效的解決了動物篩選模型效率低下等問題,但由于二維平面培養(yǎng)的細(xì)胞無法模擬體內(nèi)真實(shí)環(huán)境,導(dǎo)致藥物作用結(jié)果往往與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相差較大,不能反應(yīng)實(shí)際藥效。成體干細(xì)胞（Adult stem cells,ASCs）來源廣泛,是目前組織工程與細(xì)胞治療理想的種子細(xì)胞。三維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以真實(shí)模擬體內(nèi)微環(huán)境,有效解決二維平面培養(yǎng)的細(xì)胞與體內(nèi)真實(shí)環(huán)境差異大的問題。因此,本論文以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）為模型,通過定向分化技術(shù)獲得目標(biāo)細(xì)胞,并通過3D培養(yǎng)制備細(xì)胞微球,并以脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）為致炎誘導(dǎo)劑,構(gòu)建細(xì)胞微球炎癥模型。以期該模型在藥物篩選中獲得潛在的應(yīng)用前景。首先,制備定向分化表達(dá)載體質(zhì)粒,同時研究BMSCs生物學(xué)特性。通過基因工程技術(shù),以自剪切2A肽為連接元件構(gòu)建成肌分化表達(dá)載體質(zhì)粒與內(nèi)皮分化表達(dá)載體質(zhì)粒,質(zhì)粒雙酶切結(jié)果與測序... 

【文章來源】：華僑大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

iPSCs在藥物篩選中的應(yīng)用示意圖[41]

第1章緒論9制備性能穩(wěn)定的內(nèi)皮-肌肉微細(xì)胞團(tuán)�？疾煳⒓�(xì)胞團(tuán)內(nèi)細(xì)胞間相互作用以及3D培養(yǎng)條件對各細(xì)胞基因表達(dá)水平的影響。4、內(nèi)皮-肌肉微細(xì)胞團(tuán)炎癥模型構(gòu)建（1）以LPS為誘導(dǎo)劑刺激內(nèi)皮-肌肉微細(xì)胞團(tuán)，探索LPS對于細(xì)胞微團(tuán)的最佳致炎條件，制備細(xì)胞微團(tuán)炎癥模型并進(jìn)行表征。（2）以GBA為消炎藥物模型，考察消炎藥物對于構(gòu)建的細(xì)胞微團(tuán)炎癥模型的影響。圖1.2課題研究示意圖Fig.1.2Schematicillustrationsofthestudy1.4本論文特色與創(chuàng)新之處（1）構(gòu)建BMSCs來源的成肌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞作為自體來源的種子細(xì)胞。（2）運(yùn)用3D懸浮共培養(yǎng)技術(shù)，制備BMSCs來源的肌肉微細(xì)胞球，模擬肌肉組織在體內(nèi)的真實(shí)微環(huán)境，并應(yīng)用于藥物篩選的研究。

第2章BMSCs培養(yǎng)與分化表達(dá)載體構(gòu)建20圖2.1BMSCs細(xì)胞形態(tài)圖Fig.2.1CellmorphologyofBMSCsBMSCs生長曲線如圖2.2所示，細(xì)胞生長總體呈現(xiàn)“S”形生長趨勢，細(xì)胞傳代培養(yǎng)第4d進(jìn)入對數(shù)生長期，期間細(xì)胞增殖迅速，第7d左右達(dá)到平臺期，之后細(xì)胞增殖減緩。該生長趨勢符合一般細(xì)胞生長規(guī)律，說明細(xì)胞復(fù)蘇后生長狀態(tài)良好。同時，培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，較高代數(shù)細(xì)胞增值能力、細(xì)胞活性均大幅下降。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇較低代數(shù)且處于對數(shù)生長期的BMSCs。圖2.2BMSCs生長曲線圖Fig.2.2ThegrowthcurveofBMSCs

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DOTAP脂質(zhì)體介導(dǎo)VEGF基因轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞及目的基因的表達(dá)[J]. 陳猶白,張啟旭,Butler C E,吳葉文,張麗萍,董江陵,陳聰慧,韓巖.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2016(12)
[2]骨內(nèi)應(yīng)力環(huán)境下復(fù)合血管內(nèi)皮生長因子骨髓基質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)創(chuàng)傷性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 黃濤,陶杰,周孜輝,周淵,宋登新,傅燕飛.  中國醫(yī)藥指南. 2014(22)
[3]Application of Green Fluorescent Protein Gene （gfp） in the Symbiosis between Mesorhizobium Huakuii and Astragalus Sinicus[J]. Zhou Junchu Shi Qiaojuan Xie Bo(Huazhong Agricultural University, Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Wuhan 430070).  Science Foundation in China. 2002(02)



本文編號：3575052