目的:對人生長分化因子-15（human growth differentiation factor-15,hGDF-15）成熟肽基因進行克隆,誘導hGDF-15蛋白表達并對部分表達條件進行優(yōu)化,對建模成功的動物模型注射hGDF-15蛋白觀察其作用,為hGDF-15藥理活性和生物學功能的研究奠定基礎(chǔ)。方法:利用PCR技術(shù)克隆人GDF-15成熟肽基因,將其連接到pET-28a載體上構(gòu)建pET-28a-hGDF-15原核表達載體;在此基礎(chǔ)上將其轉(zhuǎn)入Rosetta（DE3）大腸桿菌感受態(tài),獲得重組大腸桿菌,分別采用不同溫度（16,25,37℃）、不同IPTG濃度（0.1,0.25,0.5,0.75,1mmol/L）和不同時間（12,24,36,48 h）對其進行誘導表達,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳,利用Gel Quant Express軟件對菌體破碎離心的上清組分和沉淀組分進行含量測定,設(shè)計正交試驗,分析上清組分和沉淀組分最適誘導表達條件;選用DAB顯色法對誘導出的蛋白樣品進行Western blot鑒定,利用Ni-Agarose親和柱對表達產(chǎn)物進行純化,設(shè)置不同濃度的GuNTA（2... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

hGDF-15基因和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)

pET-28a(+)載體示意圖

hGDF-15成熟肽基因PCR產(chǎn)物電泳圖譜

【參考文獻】：
期刊論文
[1]梅花鹿IGF-1的原核表達與純化[J]. 孟星宇,李婷,李沐,劉寧,田玉華,胡薇.  西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版). 2012(07)
[2]檳榔堿上調(diào)高果糖誘導胰島素抵抗大鼠骨骼肌GLUT-4和p-PI3K的表達[J]. 陳夢華,凌宏艷,周壽紅,王光,李興,胡弼.  中南醫(yī)學科學雜志. 2012(01)
[3]抗人生長轉(zhuǎn)化因子15單克隆抗體制備及鑒定[J]. 詹峰,曾曉燕,張曉,周順,徐言,張建平,焦永軍.  細胞與分子免疫學雜志. 2011(05)
[4]高脂飼料誘發(fā)C57BL/6J小鼠非酒精性脂肪肝相關(guān)指標的動態(tài)觀察[J]. 曹玉珍,張秀英.  東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2011(03)
[5]乳糖誘導人胰島素樣生長因子-1在大腸桿菌中的表達[J]. 楊漸,俞昌喜,廖聯(lián)明,廖虹婷.  海峽藥學. 2010(08)
[6]人IGF-1在大腸桿菌中的可溶表達和純化[J]. 張守濤,梁會娟,張蕓.  生物技術(shù). 2010(02)
[7]美國內(nèi)分泌學會關(guān)于糖尿病前期的會議共識(三)[J]. 扎迦利,劉海霞.  糖尿病天地(臨床). 2009(10)
[8]美國內(nèi)分泌學會關(guān)于糖尿病前期的會議共識(二)[J]. 扎迦利,劉海霞.  糖尿病天地(臨床). 2009(09)
[9]美國內(nèi)分泌學會關(guān)于糖尿病前期的會議共識(一)[J]. 扎迦利,朱釗,宋滇平.  糖尿病天地(臨床). 2009(08)
[10]疏肝健脾方藥對非酒精性脂肪性肝病大鼠肝細胞PI3K p85α蛋白表達的影響[J]. 楊欽河,歐健,孫升云,喬娜麗,程少冰,陳萬群,金玲,楊環(huán)文,李娜,紀桂元,謝維寧,林秀峰,張玉佩,薛川松.  廣東藥學院學報. 2009(01)

碩士論文
[1]抗GDF15單克隆抗體制備及功能鑒定[D]. 詹峰.南京醫(yī)科大學 2011



本文編號：3546168