目的觀察對乙酰氨基酚（APAP）誘導的小鼠急性肝損傷中Bruton酪氨酸激酶（Btk）、磷酸化Btk（p-Btk）、核因子κB（NF-κB）、核苷酸結合寡聚域樣受體蛋白3（NLRP3）、白細胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的動態(tài)變化,初步探討B(tài)tk在APAP誘導的急性肝損傷中的作用。方法隨機將54只小鼠分為9組,分別為對照組、APAP 0.5 h組、APAP 1 h組、APAP 3 h組、APAP 6 h組、APAP 12 h組、APAP 24 h組、APAP 36 h組、APAP 48 h組,每組6只。禁食12 h后,單次腹腔注射APAP（300 mg/kg） 0.5、1、3、6、12、24、36、48 h后處死相應組別的小鼠。測定各組血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）;觀察各組肝臟病理變化;ELSIA測定各組肝組織勻漿中IL-1β和TNF-α;Western blot測定肝組織中Btk、p-Btk、NF-κB及NLRP3表達。結果與對照組比較,APAP干預后的各組血清ALT（F=100.968,P=0.000）、AST（F=73.... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2020,55(08)北大核心

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不同時間點小鼠肝臟壞死面積

與對照組比較,APAP干預后的各組小鼠肝臟Btk(F=441.280,P=0.000)、p-Btk(F=1 323.022,P=0.000)、NF-κB(F=133.125,P=0.000)及NLRP3水平(F=820.095,P=0.000)含量均有變化。正常肝組織中僅有少量的Btk表達,APAP處理組小鼠隨著給藥時間的延長,Btk及p-Btk的表達逐漸增多,于24 h表達最高(P<0.01),后表達逐漸下降。NF-κB、NLRP3表達與Btk及p-Btk表達變化趨勢相一致。見圖3。表2 不同時間點肝組織IL-1β、TNF-α表達量 (n=6, x ˉ ±s) 組別 IL-1β(pg/ml) TNF-α(pg/ml) 對照 47.64±4.83 267.64±36.88 APAP 0.5 h 53.33±6.56# 2 96.87±12.88# APAP 1 h 54.05±8.90# 334.63±39.95*# APAP 3 h 61.16±9.01△# 380.42±41.38*# APAP 6 h 64.22±8.39*# 4 18.57±34.35* APAP 12 h 74.64±7.78* 441.26±20.56* APAP 24 h 81.28±7.53* 454.82±32.79* APAP 36 h 74.64±18.92* 389.08±51.33*# APAP 48 h 56.70±7.42# 370.88±20.12*# F值 8.643 20.545 P值 0.000 0.000 與對照組比較:△P<0.05,*P<0.01;與APAP 24 h組比較:#P<0.01

APAP引起的肝損傷病理組織學主要表現(xiàn)為肝小葉中心性壞死[6-7]。ALT、AST是目前評價肝臟損傷程度的常用指標。本實驗結果顯示,小鼠單次腹腔注射APAP(300 mg/kg)0.5、1 h,血清ALT、AST及肝臟病理形態(tài)學與對照組無明顯差異;其余各組血清中ALT、AST水平、3 h后各組肝細胞壞死面積明顯高于對照組,同時肝臟HE染色也可見不同程度的肝竇充血。這些生化及病理改變與相關文獻報道[6-7]一致,提示APAP誘導的小鼠肝損傷模型復制成功。本實驗研究發(fā)現(xiàn)APAP(300 mg/kg)單次干預造成的肝損傷并非完全隨時間的延長而加重,36 h后肝損傷的程度有所減輕,提示單次APAP造成的小鼠肝損傷存在自身修復過程。APAP誘導的肝細胞壞死的發(fā)生與過量服用APAP或肝臟基礎水平還原型谷胱甘肽被耗竭,代謝產(chǎn)生的N-乙酰對苯醌亞胺不能被肝臟還原型谷胱甘肽結合,造成肝細胞代謝損傷和氧化應激損傷,破壞線粒體膜等有關[1]。Btk是一種非受體型酪氨酸激酶,表達于除T淋巴細胞及漿細胞的髓系細胞。Btk通過調(diào)控中性粒細胞募集和激活參與炎癥過程[5]。當細胞受到細菌、真菌、病毒及其他危險信號的刺激時,Btk以磷酸化的形式活化后可直接調(diào)節(jié)NLRP3或間接調(diào)節(jié)NLRP3等信號進而引起炎性因子的釋放[3-4]。Btk參與調(diào)控多個重要炎癥信號轉導通路中許多關鍵的信號蛋白,包括NF-κB、NFAT、PKC、Pin1、TLRs、caveolin-1 等[8]。近期研究[5]表明在小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型中,Btk抑制劑可減輕缺血再灌注引起的肝臟炎性損傷。本實驗結果顯示:正常小鼠肝組織中僅有少量Btk表達;APAP作用24 h內(nèi),隨著APAP作用時間的延長,小鼠肝組織中Btk及p-Btk逐漸升高,肝損傷的嚴重程度與Btk及p-Btk表達變化趨勢相一致。提示Btk的活化參與了APAP肝損傷病理的形成。

【參考文獻】：
期刊論文
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