近年來,Adcetris（?）和 Kadcyla（?）等抗體偶聯(lián)藥物（antibody-drug conjugates,ADCs）在臨床上取得了顯著的成功,再一次證實ADCs是一種對抗癌癥的強大武器。但傳統(tǒng)的偶聯(lián)方法通過抗體上賴氨酸殘基或鏈間二硫鍵還原產(chǎn)生的半胱氨酸殘基共價連接細胞毒性藥物,所獲得的ADCs的藥物抗體偶聯(lián)比（drug to antibody ratio,DAR）和偶聯(lián)位點的變動性較大,導致較大的異質性。因此,定點偶聯(lián)技術亟待開發(fā)。1直接酶法制備抗體偶聯(lián)藥物Sortase A酶（SrtA）介導的偶聯(lián)反應能特異性識別LPXTG并連接一系列含寡甘氨酸的底物,但由于野生型SrtA的動力學性質比較差,為保證有效的偶聯(lián),需要加大酶的用量,延長反應時間,限制了其廣泛應用。前期研究中我們利用野生型SrtA（AN59）催化抗CD20抗體ofatumumab（OFA）定點偶聯(lián)海兔毒素衍生物（Monomethyl auristatin E,MMAE）制備抗 CD20 抗體偶聯(lián)藥物 OFA-vcMMAE。最近報道篩選出了活性更強的突變型SrtA（7M）,我們表達了野生型SrtA（AN59）和突... 

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【學位級別】：碩士

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圖１．１抗體偶聯(lián)藥物結構示意圖

早在一個世紀前，德國免疫學者Ｐａｕｌ?Ｅｈｒｌｉｃｈ就提出了“魔術子彈”的概念［１］。??抗體偶聯(lián)藥物（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ?ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，?ＡＤＣｓ）由抗體、細胞毒性藥物、以及??連接物（ｌｉｎｋｅｒ）三部分組成（圖１．１），以抗體為載體，選擇性將“彈頭”藥物送至??靶細胞，與腫瘤細胞表面特異性抗原結合，并通過細胞內吞作用進入溶酶體，在??溶酶體內被組織蛋白酶等水解酶水解，釋放出細胞毒性藥物，特異性殺死腫瘤細??胞（圖１．２）。與化療和聯(lián)合治療相比，ＡＤＣｓ選擇性好，能顯著減少脫靶毒性，??招寬治療窗。近年來，Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ?ｖｅｄｏｔｉｎ?（Ａｄｃｅｔｒｉｓ？，ＳＧＮ－３５）和Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ??ｅｍｔａｎｓｉｎｅ?（Ｋａｄｃｙｌａ？，Ｔ－ＤＭ１）等ＡＤＣｓ在臨床上取得了顯著的成功，再一次證實??ＡＤＣｓ是一種對抗癌癥的強大武器［２－５］。??Ｈｉ?下??圖１．１抗體偶聯(lián)藥物結構示意圖。ＡＤＣｓ由抗體、細胞毒性藥物、以及連接物三部??分組成。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ?ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．?ＡＤＣｓ?ｃｏｎｓｉｓｔ?ｏｆ?ａ?ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ??ｄｒｕｇ?ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ?ｔｏ?ａ?ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｂｙ?ｍｅａｎｓ?ｏｆ?ａ?ｓｅｌｅｃｔ?ｌ

（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，Ｒｉｔｕｘａｎ？）、奧法木單抗（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ，Ａｒｚｅｒｒａ？）、托西莫單抗??（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ，ＢｅｘｘａｒＢ）和阿托珠單抗（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ，ＧａｚｙｖａＫ）等。??抗ＣＤ２０抗體通過數(shù)種機制導致腫瘤細胞死亡［１０］（圖１．３）。首先，抗體和ＣＤ２０??的結合可通過Ｃｌｑ激活補體級聯(lián)反應，進而導致細胞死亡或補體蛋白在細胞膜上??沉積，這種現(xiàn)象被稱為補體依賴的細胞毒作用（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，??ＣＤＣ）。另外，抗體結合的靶細胞也可通過抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用??（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，?ＡＤＣＣ）而被表迗Ｆｅｙ受體的免疫??細胞殺死。此外，和ＣＤ２０結合的抗體也有可能發(fā)揮直接抗增殖效應或主動誘導細??胞凋亡。??典法木ｍ抗??結合位說??補體介導的溶怍用?利妥執(zhí)??托西興電ｍ??蚺臺ｃｈ?ｗ托珠？ｍ??？Ｘ?＼?坫—？??？隱４丨Ｈ??？合抗體?人類伉休??Ｉ利妥情》沆）?法木明??和妞相生長抑制??圖１．３抗ＣＤ２０抗體的作用機制［１（）］�？贵w結合ＣＤ２０通過補體依賴的細胞毒作用、??抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用以及直接抗增殖效應誘導細胞凋亡。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｔｈｒｅｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎｔｉ－ＣＤ２０?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１１０］．?Ｉｎ??ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ?（ＣＤＣ）


本文編號：3464692