發(fā)布時間：2021-10-16 02:55

　　隨著耐藥菌的不斷出現,新結構和新作用機制抗生素的發(fā)掘變得尤為迫切。微生物天然產物是新型抗生素的重要來源�；蚪M數據顯示微生物基因組中含有大量隱性的次級代謝生物合成基因簇,基因組挖掘是發(fā)現這些隱性次級代謝產物的有力工具。多環(huán)特特拉姆酸大環(huán)內酸胺（polycyclic tetramate macrolactam,PoTeM）是一類具特特拉姆酸（tetramic acid）結構單元及多環(huán)體系的大環(huán)內酰胺類化合物,具有良好的生物學活性。根據多環(huán)體系的不同,PoTeMs可以分為5/5/6三環(huán),5/6/5三環(huán)和5/5雙環(huán)3個亞類,以HSAF（5/5/6）、ikarugamycin（5/6/5）和alteramide A（5/5）為主要代表。值得注意的是三環(huán)體系中第一個環(huán)有2種成環(huán)方式,如HSAF 中為C14/C18 成環(huán),ikarugamycin中則為C15/C19成環(huán)。PoTeMs以其新穎的化學結構和獨特的作用方式,正逐漸形成一個新的抗生素家族。本研究基于PoTeMs類化合物核心基因的保守性和簡潔性,以基因序列為指導定向尋找新PoTeMs類化合物。我們對課題組已有菌株的基因組分析,發(fā)現Strep... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：119 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．７?（Ａ）?Ｚｐｏｋｄｅｒ?ｅｖｙｗｏｇｅ？ｅＳ?Ｃ３中ＨＳＡＦ生物合成基因簇的組成；（Ｂ）?ＨＳＡＦ多烯骨架??

開發(fā)了多種激活的策略［４９－５１］，可以用于激活ＰｏＴｅＭ基因簇。近期，Ｓａｌａｓ和他??的同事最近嘗試激活５個編碼天然產物的“隱性”基因簇，包括１個類似于??ｆｉｏｎｔａｌａｍｉｄｅｓ的ＰｏＴｅＭ生物合成基因簇［３２］（圖１．９）。Ｓａｌａｓ等在ＰｏＴｅＭ基因簇的??？？岐＿０５７／２和基因前插入１個組成型啟動子ｅｒｗ五ｐ＊進行轉錄激活。??在模式菌株中，該方法成功地激活了?ＰｏＴｅＭ基因簇，并鑒定出２??個新的?ＰｏＴｅＭｓ?化合物?６－ｅｐｉ－ａｌｔｅｒａｍｉｄｅｓ?Ａ（３８）和?Ｂ?（３９）（圖?１．１０）。??有趣的是，距離＾％＿０５７ｉ２基因上游７．６?ｋｂ的ＬｕｘＲ家族轉錄調控因子編碼??基因５＾ｇ＿０５７０ｄ的過表達會導致６－ｅｐｉａｌｔｅｒａｍｉｄｅ?Ａ?（３８）的過量生產但僅生產較??少的６－ｅｐｉａｌｔｅｒａｍｉｄｅ?Ｂ?（３９）［３２］。ＬｕｘＲ家族轉錄調控因子曾被認為是生物合成途??徑特異性激活因子，其過表達已被證明是激活“隱性”生物合成基因簇的有效途徑。??值得注意的是，在已鑒定的ＰｏＴｅＭ基因簇中，＾／＾＿０５７抓并不保守。利用同樣??的啟動子置換策略，成功激活了一個位于海洋來源鏈霉菌Ｓ＾ｅｐ／＇ｏｍｙｃｅｓ?ｓｐ．??ＳＣＳＩＯ０２９９９沙霉素生物合成簇附近的沉默ＰｏＴｅＭ生物合成基因簇

步分離純化，獲得１個生物合成中間體ｃｏｍｐｏｕｎｄ?ｃ?（４７，Ａｌｔｅｒａｍｉｄｅ?Ａ的類似物，??不含有２５－羥基并且Ｃ－１４有不同的立體化學），敲除基因的突變株中分??離出罕見的具有５／４／６三環(huán)的化合物ｃｏｍｐｏｕｎｄ?ｄ?（６２）（圖１．１１）。此外，由??ＳＧ／？Ｓ７２－Ｓ以組成的３個基因盒合成了異源產物５２。而由ＳＧｉ？Ｓ７２－Ｓｉ５組成的四??基因盒則產生了異源產物３６。采用基因敲除和異源重組相結合的方法，證明基??因５＾及５７７－＜５７５參與化合物ｃｏｍｐｏｕｎｄ?ａ?（３６）和ｃｏｍｐｏｕｎｄ?ｂ?（４６）的生物合成，并闡??明了?ＳＧＲ８１５?（與ＨＳＡＦ通路中的甾醇去飽和酶和ｆｒｏｎｔａｌａｍｉｄｅ通路中的ＦｔｄＦ同??源）為Ｃ－２５羥化酶。在此基礎上，提出３６和４６在Ｓ．?ｇｒｆｗｗ的生物合成途徑，??并預測５２為關鍵生物合成中間體［３７］。??１６??


本文編號：3439008