發(fā)布時間：2021-10-13 12:27

　　背景:甲基苯丙胺（METH）是一種高度成癮的苯丙胺類精神刺激藥物,在世界范圍內(nèi)被普遍濫用。長期濫用METH會導致神經(jīng)元凋亡、線粒體功能障礙等問題。α-突觸核蛋白（α-syn）是一種神經(jīng)元蛋白,METH會引起α-syn過表達,從而造成多巴胺能神經(jīng)元損傷。星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中最大的神經(jīng)膠質(zhì)細胞群體,對于維持大腦穩(wěn)態(tài)、保護神經(jīng)元至關重要,METH作用后,腦內(nèi)星形膠質(zhì)細胞激活增生。研究發(fā)現(xiàn)α-syn在細胞間可以進行類阮蛋白式的傳播,而星形膠質(zhì)細胞是否在α-syn相關病理中起作用,以及具體的分子機制仍需進一步研究。目的:使用METH中毒體內(nèi)外模型,檢測星膠內(nèi)α-syn表達量的變化,探究α-syn是否可以從神經(jīng)元傳遞至星形膠質(zhì)細胞;通過檢測神經(jīng)元細胞分泌的外泌體內(nèi)α-syn表達量的變化,探究α-syn傳遞的方式;通過檢測星膠內(nèi)炎癥因子及Nurr1表達量的變化,探究α-syn進入星形膠質(zhì)細胞后星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的病理變化及分子機制。方法:第一章.建立小鼠METH慢性中毒小鼠模型、原代細胞模型以及SH-SY5Y細胞和U87MG細胞共培養(yǎng)模型,利用WB、IHC、IF等方法檢測小鼠海馬腦區(qū)... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞培養(yǎng)妯屮外泌體的分離及鑒定??５３??

ＩＬ６??４－．?３＞ｊ?３－ｉ??１?＊？?ｆ?＊?？?？??－？?３－?－ｆ—?Ｉ?Ｔ＂?－Ｓ?Ｊ．＿??ｉ?ｒ￣ｎ?ｉ２＇?ｒ＼?ｒ－?ｉ??ｔ２＇?５．?－ｒ－?Ｓ．?—??＞?ｒ＾Ｔ－?｜１－?？！［?ｒｎ＝ｎ?「＝１??ｌ１－?［＾ｎ?！?！??ａ：?ｃｔ?〇：??ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ?ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ?〇?ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ??圖２－３?ＭＥＴＨ組細胞外泌體可以增加星形膠質(zhì)細胞中炎癥因子的表達??Ｆｉｇ．?２－３?Ｅｘｏｓｏｍｅｓ?ｓｅｃｒｅｔｅｄ?ｂｙ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＭＥＴＨ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｃａｎ?ｉｎｃｒｅａｓｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ??ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ?ｆａｃｔｏｒｓ?ｉｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ??２．４敲除ａ－ｓｙｎ后星形膠質(zhì)細胞炎癥反應緩解??為了驗證ｃｘ－ｓｙｎ在ＭＥＴＨ組細胞外泌體誘導的星形膠質(zhì)細胞炎癥中所起的作??用，我們使用ａ－ｓｙｎ基因敲除（ＷＣ／ＴＡ）小鼠和野生型（ＨＴ）小鼠分離培養(yǎng)原??代神經(jīng)元，使用ＰＢＳ或ＭＥＴ丨丨處理神經(jīng)元２４?ｈ后提取外泌體。將這些外泌體添??加到星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基中。利用ＷＢ技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細胞中促炎因子的表??達量。結(jié)果表明：相較于ＰＢＳ組，ＭＥＴＨ組細胞外泌體處理后，星形膠質(zhì)細胞??炎癥因子表達量明顯升高；值得注意的是４?ＭＥＴＨ纟Ｕ?祌經(jīng)幾外泌體相比，??ＭＥＴＨ組５ＷＣＴＡ神經(jīng)元外泌體作用］４丨形膠質(zhì)細胞后，Ｍ形膠質(zhì)細胞中炎癥因??ｆ的表達Ｓ冇所下降（圖２－４?Ａ－Ｉ））。丨：述結(jié)果

ｏ??ＳＮＣＡ，－?＋?＋??Ｃ?Ｄ??ＩＬ１－Ｐ?ＩＬ６??４ｎ?４－??０?？??１?３－?Ｔ?Ｉ?３－?＊＊＊??ｉ?Ｉ?＂＂＂?＃??Ｉ２＇?林?Ｉ２＇?ｒ＾－ｉ??｜?ｒ－—－，?｜??５?１－?，－＝－，?ｓ?１－?，??＂５?〇）??ａ：?ｔｒ??０?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?〇?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ??Ｈ／ＴＥＸＯ?ＳＮＣＡ＇?ＥＸＯ?ＩＶ７ＥＸＯ?ＳＮＣＡ＇?ＥＸＯ??圖２－４敲除ａ－ｓｙｎ可以緩解星形膠質(zhì)細胞中的炎癥反應??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｏｆ?ａ－ｓｙｎ?ｒｅｄｕｃｅｄ?ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ?ｉｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．??２．５外源性ａ－ｓｙｎ誘導星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生炎癥反應??為了進一步驗證ａ－ｓｙｎ對星形膠質(zhì)細胞炎癥反應的作用，我們將體外重組??ａ－ｓｙｎ蛋白直接加入到星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)基中。利用ＷＢ技術(shù)檢測星形膠質(zhì)細??胞中ＴＮＦ－ａ、ＩＬｌ（３和ＩＬ６等炎癥因子的表達１：。結(jié)果表明，相較于ＰＢＳ組ＭＥＴＨ??組和ａ－ｓｙｎ組星形膠質(zhì)細胞中炎癥因子的表達量均顯著增加，而且當同時使用??ＭＥＴＨ和ａ－ｓｙｎ時，炎癥因子表達增加量更大（圖２－５?Ａ－Ｄ）。這些結(jié)果表明，ａ－ｓｙｎ??可以誘導星形膠質(zhì)細胞產(chǎn)生炎癥反應，并且與ＭＥＴＨ存在協(xié)同作用。??５６??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3434665