發(fā)布時(shí)間：2021-09-24 07:31

　　目的:他克莫司是器官移植病人抗排斥治療中最為常用的免疫抑制劑。細(xì)胞色素P450 3A5（CYP3A5）是他克莫司個(gè)體化用藥中最重要的影響因素。CYP3A5基因是導(dǎo)致個(gè)體間CYP3A5蛋白差異表達(dá)的主要原因,CYP3A5基因分型結(jié)果對他克莫司的合理用藥來說有重要參考意義。為了評估各大實(shí)驗(yàn)室對CYP3A5基因的檢測結(jié)果的一致性及準(zhǔn)確性,本研究制備了用于他克莫司CYP3A5基因突變個(gè)體化檢測的質(zhì)控物,并評價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的檢測能力,以提高CYP3A5基因分型檢測在臨床的合理應(yīng)用。方法:選取涵蓋常見的已知CYP3A5基因多態(tài)性的細(xì)胞株10株,采用Sanger測序法驗(yàn)證其多態(tài)性位點(diǎn)。驗(yàn)證通過后將10株細(xì)胞系進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)和基因組DNA的大量提取、稀釋和分裝。向參加室間質(zhì)量評價(jià)的各實(shí)驗(yàn)室發(fā)放制備的質(zhì)控品,1周后回收回報(bào)表并對各實(shí)驗(yàn)室的檢測結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),對檢測報(bào)告進(jìn)行評估。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)室CYP3A5基因Sanger測序結(jié)果均符合預(yù)期。共有33家實(shí)驗(yàn)室參與本研究并回報(bào)數(shù)據(jù),檢測的靈敏度為95.9%（285/297個(gè)檢測;95%置信區(qū)間:93.0–97.9%）,特異度為95.3%（346/363;95%置信... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各細(xì)胞系擴(kuò)增片段電泳圖

圖 3-2 本實(shí)驗(yàn)室 10 株細(xì)胞系 Sanger 測序結(jié)果注：A. GM17289，第170號位點(diǎn)為AG型；B. GM16654，172號位點(diǎn)為GG型；C. GM17240，173 號位點(diǎn)為 GG 型；D. GM17215，170 號位點(diǎn)為 GG 型；E. GM16699，第 174 號位點(diǎn)為GG 型；F. GM 19178，第 169 號位點(diǎn)為 AA 型；G. GM 23275，第 169 號位點(diǎn)為 AA 型；H. GM10847，第 168 號位點(diǎn)為 GG 型；I. GM 11839，第 168 號位點(diǎn)為 AG 型；J. GM 12003，第 171號位點(diǎn)為 AG 型。3.1.2.2 部分參與實(shí)驗(yàn)室 CYP3A5 分型結(jié)果除個(gè)別實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)分型錯誤之外，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的分型結(jié)果均正確，少數(shù)實(shí)驗(yàn)室在結(jié)果報(bào)告單中回報(bào)了 C1701 號樣本 CYP3A5 基因分型的結(jié)果圖，其檢測結(jié)果與本研究預(yù)期的基因型一致，如圖 3-3 及圖 3-4，提示本研究制備的質(zhì)控物在各臨床和商業(yè)實(shí)驗(yàn)室的檢測中得到進(jìn)一步驗(yàn)證。

圖 3-3 某臨床實(shí)驗(yàn)室 C1701 號樣本 Sanger 測序結(jié)果圖 3-4 某臨床實(shí)驗(yàn)室 C1701 號樣本焦磷酸測序結(jié)果3.2 室間質(zhì)量評價(jià)調(diào)查結(jié)果3.2.1 參與實(shí)驗(yàn)室與檢測方法在 33 家參與實(shí)驗(yàn)室中，有 15 家實(shí)驗(yàn)室屬于臨床實(shí)驗(yàn)室，其余 18 家實(shí)驗(yàn)室


本文編號：3407358