本實驗旨在應用高效液相色譜（HPLC）法定量檢測人成骨樣細胞—MG63細胞對載辛伐他汀納米膠束（SVNs）的攝取情況.首先,建立檢測SVNs中SV含量的HPLC法,確定色譜條件,并對該方法的專屬性與準確性進行評價.其次,將SVNs與辛伐他汀（SV）干預細胞,在加藥后的不同時間終止實驗,反復凍融破碎細胞,提取胞內(nèi)藥物并用HPLC法對其進行檢測.結(jié)果顯示,當流動相比例為30:70（V/V）時,定量檢測SVNs中SV含量的標準曲線擬合方程為y=33782x-1424.5（R2=0.9999）,線性范圍為0.2～3.2μg/mL.該方法專屬性與準確性均較高,并成功檢測出了被MG63細胞攝取到胞內(nèi)的藥物含量.同時,在加藥早期,SVNs與SV相比,SVNs被MG63細胞攝取的速度較慢,但胞內(nèi)藥物含量顯著高于SV,SVNs與SV被MG63細胞攝取存在顯著差異. 

【文章來源】：深圳職業(yè)技術(shù)學院學報. 2020,19(05)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

SV標準品主成分峰保留時間

MG63細胞對SVNs和SV的攝取情況見圖3．結(jié)果顯示，在SVG中，MG63細胞對SV的攝入十分迅速，15 min時胞內(nèi)藥物濃度即達到最高峰．而MG63細胞對SVNs的攝入速度較慢，從30 min開始，MG63對載藥膠束的攝入量才開始逐漸增多．SVNs被成骨細胞攝取速度較慢的原因可能與其粒徑過小及表面未帶電荷有關(guān)系．已有研究顯示，載藥納米膠束的粒徑、表面所帶電荷情況等都可影響細胞對載藥納米膠束的攝�。袑W者[17]報道載藥納米膠束的粒徑在約50 nm時，其被細胞攝取的效率是最高的；而當納米表面帶正電荷時，可增加載藥納米膠束與細胞膜的吸附能力，從而增加其被細胞攝取的效率[18]．在今后的實驗中，通過控制SVNs的粒徑，并對其表面進行修飾，可增加其被細胞攝取的效率，從而發(fā)揮出更強的促細胞成骨分化作用．圖3 MG63細胞對SVNs與SV在不同時間點的攝取情況（n=6;*P<0.05;**P<0.01)

圖2 HPLC法測定SV的專屬性色譜圖同時，SVG中的胞內(nèi)SV含量在達到高峰后隨即迅速下降，這種現(xiàn)象在多形核白細胞攝取亞胺培南[19]、人牙周膜成纖維細胞攝取甲硝唑和替硝唑[20]及紅細胞攝取抗癌鉑的配合物[21]等實驗中均有出現(xiàn)．其可能的原因是，SV以被動擴散的方式進入胞內(nèi)后容易被水解代謝，導致含量下降；也可能是藥物與細胞膜相互作用使膜通透性發(fā)生改變，導致藥物漏出細胞外；此外，細胞膜上的外排蛋白是否也有參與，有待后續(xù)實驗加以驗證．


本文編號：3354853