目的研究二氫楊梅素（dihydromyricetin,DMY）對(duì)阿霉素（adriamycin,DOX）在肝癌化療中的增效作用并研究其可能作用機(jī)制。方法不同濃度DMY作用肝癌細(xì)胞系MHCC97H后,CCK-8法篩選無(wú)毒劑量的DMY,用無(wú)毒劑量的DMY聯(lián)合不同濃度DOX作用MHCC97H細(xì)胞,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力;Hoschest染色法測(cè)定細(xì)胞凋亡情況;通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法測(cè)定PTEN、p-AKT、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、裂解的caspase-3和裂解的caspase-9;合成特異性靶向PTEN基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體,建立穩(wěn)定沉默PTEN基因的MHCC97H細(xì)胞,檢測(cè)沉默PTEN后是否影響DMY聯(lián)合DOX對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用;通過(guò)裸鼠皮下腫瘤細(xì)胞注射法建立MHCC97H裸鼠異種移植模型,觀察DMY聯(lián)合DOX給藥對(duì)體內(nèi)肝癌生長(zhǎng)的影響,Tunel法測(cè)定體內(nèi)肝癌細(xì)胞凋亡,Ki-67和PTEN在移植瘤組織中的表達(dá)通過(guò)免疫組織化學(xué)法測(cè)定。結(jié)果無(wú)毒劑量的DMY與DOX聯(lián)合應(yīng)用能顯著提高DOX對(duì)體外MHCC97H細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和凋亡誘導(dǎo)作用;DMY聯(lián)合DOX可上調(diào)體外肝癌MHCC9... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,37(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

DMY單獨(dú)(A)及聯(lián)合DOX(B)對(duì)體外MHCC97H細(xì)胞PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響

分別用不同濃度DMY(1、2.5、5、10、25、50、100 μmol·L-1)培養(yǎng)MHCC97H細(xì)胞24 h,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,結(jié)果表明DMY對(duì)體外肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制呈濃度依賴關(guān)系(圖1A),10 μmol·L-1的DMY對(duì)約90%的細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒性,表明濃度不超過(guò)10 μmol·L-1的DMY對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有影響,因此本研究作者選擇10 μmol·L-1的DMY進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如圖1B所示,與單用不同濃度的DOX溶液(0.25、0.5、1、2、5、10、25、50、100 μmol·L-1)相比較,濃度為 10 μmol·L-1 DMY溶液和DOX聯(lián)合應(yīng)用會(huì)提高M(jìn)HCC97H細(xì)胞對(duì)DOX的敏感性,DOX與DMY聯(lián)合作用的IC50值和DOX單藥治療的IC50值分別為11.373 μmol·L-1和3.636 μmol·L-1。此外,濃度10 μmol·L-1 DMY溶液聯(lián)合濃度2 μmol·L-1DOX溶液作用后細(xì)胞存活率較單獨(dú)使用DOX顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),因此選擇濃度為2 μmol·L-1的DOX溶液用于本研究后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.2 DMY聯(lián)合DOX對(duì)MHCC97H細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用

通過(guò)Hosches 33342染色的細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察到的形態(tài)學(xué)特征如圖2所示,在熒光顯微鏡下觀察到正常MHCC97H細(xì)胞發(fā)出均勻藍(lán)色熒光,而凋亡細(xì)胞中可見(jiàn)核濃縮和染色體凝集,呈亮藍(lán)色熒光,在熒光顯微鏡下統(tǒng)計(jì)每200×視野下的凋亡細(xì)胞比例。對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為(4.7±1.2)%,濃度10 μmol·L-1的DMY溶液或濃度2 μmol·L-1DOX溶液作用后可見(jiàn)MHCC97H細(xì)胞核發(fā)生波紋狀改變,部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮和邊緣化,誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率分別為(6.3±1.4)%和(13.6±2.4)%,DOX組的細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外,DMY和DOX聯(lián)合治療組可見(jiàn)較多MHCC97H細(xì)胞核發(fā)生裂解并形成凋亡小體,細(xì)胞凋亡率為(22.8±4.1)%,與DOX組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),表明DMY聯(lián)合DOX可顯著誘導(dǎo)體外MHCC97H細(xì)胞凋亡。3.3 DMY通過(guò)調(diào)控PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路增強(qiáng)MHCC97H細(xì)胞對(duì)DOX的敏感性


本文編號(hào)：3298653