目的建立用于測定硫酸新霉素效價的高效液相色譜-脈沖安培電化學(xué)檢測器法（HPLC-PAD）。方法建立并驗證HPLC-PAD法,測定硫酸新霉素各主要組分含量及相關(guān)物質(zhì);采用在線膜抑制脫鹽技術(shù)輔助LC-IT-TOF法測定硫酸新霉素雜質(zhì)譜,結(jié)合組分活性研究確定了硫酸新霉素的主要活性組分;采用半制備液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器串聯(lián)制備硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波譜手段進行結(jié)構(gòu)確證;采用質(zhì)量平衡法測定二者的純度;采用三劑量抗生素微生物檢定法測定B、C精制品各自的效價值,推導(dǎo)公式計算出硫酸新霉素的量效轉(zhuǎn)換系數(shù),設(shè)計實驗進行交互作用考察及實際樣品的驗證。結(jié)果建立的HPLC-PAD方法在分離能力及方法的穩(wěn)定性上均優(yōu)于《歐洲藥典》（EP）方法,適用于硫酸新霉素各組分的準確定量及有關(guān)物質(zhì)檢查;在線膜抑制脫鹽技術(shù)成功地去除了流動相中的三氟乙酸,對硫酸新霉素的雜質(zhì)譜進行研究,結(jié)合活性研究結(jié)果,確定新霉素B和新霉素C為新霉素的主要活性組分;成功制備獲得新霉素B、C精制品,通過實驗和計算獲得了硫酸新霉素的量效轉(zhuǎn)換系數(shù),并通過了驗證。結(jié)論初步實現(xiàn)了儀器法對微生物生物檢定法的替代,基本完成了多組分氨基糖苷類抗... 

【文章來源】：中國藥學(xué)雜志. 2020,55(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

硫酸新霉素有關(guān)物質(zhì)測定四電位檢測電位積分圖

由于新霉素B、新霉素C沒有紫外吸收基團，無法采用常規(guī)的以紫外檢測器為指導(dǎo)的制備液相，因此我們將ELSD檢測器與制備液相組裝搭建進行兩個組分的制備。2.3.1 組分的制備及結(jié)構(gòu)確證

采用在線膜抑制脫鹽技術(shù)輔助LC-IT-TOF法測定了新霉素的雜質(zhì)譜，除新霉素B和新霉素C外，共有12個相關(guān)雜質(zhì)。通過相對保留時間和質(zhì)譜數(shù)據(jù)分別比對各雜質(zhì)信息，可定位新霉胺(峰4)、核糖霉素(峰7)、巴龍霉素Ⅱ(峰10)、新霉素C(峰11)和新霉素B(峰13);通過一級二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)可推定峰3為巴龍霉胺、峰6為乙酰新霉胺、峰9為巴龍霉素I，峰14為乙酰新霉素B。峰1、峰2、峰5、峰8和峰12為未知雜質(zhì)。通過對各已知組分及已知雜質(zhì)的裂解規(guī)律比對，推定出12個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu);根據(jù)有關(guān)物質(zhì)強制降解實驗、穩(wěn)定性實驗相關(guān)資料及原料藥中雜質(zhì)的變化推測出各雜質(zhì)可能來源，其中主要降解雜質(zhì)為新霉胺，為新霉素B或新霉素C酸性降解雜質(zhì)，其他雜質(zhì)多為工藝雜質(zhì)，雜質(zhì)來源見表4。表4 圖3中各峰LC-IT-TOF測定數(shù)據(jù)、推定結(jié)構(gòu)及來源分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HPLC-PAD法測定硫酸新霉素含量及其有關(guān)物質(zhì)[J]. 張倩,黃敏文,FANG Wang,張玫,杭太俊,袁耀佐.  中國藥科大學(xué)學(xué)報. 2019(02)
[2]氨基糖苷類抗生素組分控制進展[J]. 袁耀佐,張玫,胡昌勤.  中國藥學(xué)雜志. 2017(20)
[3]采用柱后抑制器技術(shù)降低流動相中三氟乙酸對質(zhì)譜信號抑制作用的研究[J]. 張婷婷,劉綠葉,張艷海,金燕.  分析測試技術(shù)與儀器. 2017(01)
[4]LC-PED法測定硫酸依替米星注射液及硫酸依替米星氯化鈉注射液中有關(guān)物質(zhì)[J]. 吳宇寧,趙衛(wèi),朱曉玥,袁耀佐,張玫,徐寒梅,潘廣文,譚力.  中國抗生素雜志. 2016(08)
[5]《中國藥典》2015年版慶大霉素C組分限度修訂——從相對含量到絕對含量的飛躍[J]. 常艷,姚尚辰,胡昌勤.  中國抗生素雜志. 2016(01)
[6]HPLC-PAD法測定鹽酸大觀霉素含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 王琰,姚尚辰,王明娟,鄒文博,薛晶,李進,張力,劉春亮,胡昌勤.  中國抗生素雜志. 2014(06)
[7]高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測食品中糖的應(yīng)用進展[J]. 李仁勇,梁立娜,牟世芬.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2010(07)
[8]高效液相色譜-電噴霧-離子阱質(zhì)譜法推定硫酸依替米星中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)[J]. 袁耀佐,張玫,錢文,張正行.  分析化學(xué). 2010(06)
[9]糖的高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法分析[J]. 牟世芬,于泓,蔡亞岐.  色譜. 2009(05)
[10]硫酸核糖霉素及新霉胺的反相高效液相色譜分析[J]. 楊大軍,許鴻章,陳汝賢.  中國抗生素雜志. 1990(05)



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