細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶1（Cyclin dependent kinase 1,CDK1）對(duì)細(xì)胞生存至關(guān)重要,在很多生物學(xué)過(guò)程中都發(fā)揮著必不可少的作用,包括細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期檢查位點(diǎn)激活等。本課題研究發(fā)現(xiàn)CDK1在S期促進(jìn)新生DNA鏈的合成,豐富了對(duì)CDK1功能的認(rèn)識(shí)。我們發(fā)現(xiàn)利用小分子化合物在不引起細(xì)胞周期變化的情況下抑制CDK1,可以引起顯著的DNA損傷反應(yīng),包括γH2AX和RPA的磷酸化,且呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)抑制CDK1引起的DNA損傷與DNA復(fù)制相關(guān),并最終導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定性。本研究還發(fā)現(xiàn)抑制CDK1的活性可以明顯增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,包括PARP抑制劑Olaparib—一種新型的抗腫瘤特效藥。這些發(fā)現(xiàn)揭示了 CDK1的多功能性,對(duì)腫瘤化療中的聯(lián)合用藥可能具有一定的借鑒意義。 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．短時(shí)間抑制ＣＤＫｌ能以時(shí)間依賴(lài)和濃度依賴(lài)的方式導(dǎo)致ＤＮＡ損傷反應(yīng)

ｆｏｃｉ在復(fù)制期細(xì)胞和非復(fù)制細(xì)胞中的分布。我們胸腺嘧啶類(lèi)似物用ＥｄＵ染色來(lái)標(biāo)??記ＤＮＡ復(fù)制，ＥｄＵ陽(yáng)性則表明細(xì)胞發(fā)生ＤＮＡ復(fù)制。結(jié)果顯示短時(shí)間抑制ＣＤＫ１??主要在ＥｄＵ陽(yáng)性細(xì)胞中導(dǎo)致了顯著的ＤＮＡ損傷反應(yīng)（圖２Ａ－Ｂ）。進(jìn)而通過(guò)對(duì)單??細(xì)胞進(jìn)行分析，我們觀察到大部分的ｙＨ２ＡＸｆｏｃｉ點(diǎn)與ＤＮＡ復(fù)制位點(diǎn)共定位，說(shuō)明??抑制ＣＤＫ１引起的ＤＮＡ損傷確實(shí)與復(fù)制相關(guān)。此外，我們應(yīng)用了明確能引起ＤＮＡ??復(fù)制相關(guān)損傷的順鉑作為陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果表明其引起的ＥｄＵ－ＹＨ２ＡＸ共定位比例與??抑制ＣＤＫ１接近（圖２Ｃ－Ｄ），而通過(guò)化學(xué)切割ＤＮＡ鏈造成復(fù)制無(wú)關(guān)的ＤＮＡ損傷??的博萊霉素并未引起與ＥｄＵ共定位的ｙＨ２ＡＸ?ｆｏｃｉ?（圖２Ｃ－Ｄ），這些結(jié)果證實(shí)了短??時(shí)間抑制ＣＤＫ１確實(shí)通過(guò)作用于ＤＮＡ復(fù)制從而引起損傷反應(yīng)。當(dāng)用一種ＤＮＡ聚??合酶抑制劑阿非迪霉素完全阻滯ＤＮＡ復(fù)制時(shí)，抑制ＣＤＫ１未能引起ＤＮＡ損傷反??應(yīng)，再次佐證了?ＣＤＫ１防止ＤＮＡ復(fù)制相關(guān)損傷的作用（圖２Ｅ）。綜上所述，這些??結(jié)果表明ＣＤＫ１在防止復(fù)制相關(guān)的ＤＮＡ損傷中發(fā)揮重要作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果??結(jié)果，我們運(yùn)用胸腺嘧啶雙阻斷法將細(xì)胞同步在Ｇ１／Ｓ轉(zhuǎn)換點(diǎn)，再釋放細(xì)胞進(jìn)入Ｓ??期，然后在不同的時(shí)間點(diǎn)用ＥｄＵ標(biāo)記ＤＮＡ合成（圖３Ｄ），再利用流式細(xì)胞術(shù)分??析ＥｄＵ熒光強(qiáng)度，定量檢測(cè)抑制ＣＤＫ１對(duì)于ＤＮＡ新生鏈合成的影響。結(jié)果顯示??在Ｓ期不同階段抑制ＣＤＫ１都導(dǎo)致了?ＥｄＵ熒光強(qiáng)度顯著減少，特別是Ｓ期中期（圖??３Ｅ）。這些結(jié)果都說(shuō)明了?ＣＤＫ１對(duì)于Ｓ期新生ＤＮＡ的有效合成是必需的。此前有??觀點(diǎn)認(rèn)為：在有絲分裂之前


本文編號(hào)：3261583