川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）是傘形科蒿本屬植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort根莖中分離提純的一種生物堿為中藥川芎的有效活性成分之一。目前已有很多文獻報道TMP具有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的活性,但由于甲基易被氧化而導(dǎo)致其半衰期短、生物利用度低,限制其臨床應(yīng)用。為了克服其缺點,我們合成了一系列川芎嗪芪類衍生物并篩選出具有較好活性的DLJ14（（E）-2-（2,4,-二甲氧基苯乙烯基）-3,5,6-三甲基吡嗪）。前期實驗結(jié)果已經(jīng)證實：DLJ14能逆轉(zhuǎn)人慢性粒細胞性白血病耐阿霉素細胞株K562/A02和人乳腺癌耐阿霉素細胞株MCF-7/A對阿霉素的耐藥性。但是,DLJ14和阿霉素合用后提高阿霉素抗腫瘤作用的機制并沒有完全闡明。本課題將進一步探討川芎嗪芪類衍生物DLJ14和阿霉素合用對人乳腺癌耐阿霉素細胞MCF-7/A體內(nèi)外增殖的抑制作用及作用機制。首先,體外MTT實驗表明：DLJ14和阿霉素合用能明顯增強對MCF-7/A細胞的抑制作用,與阿霉素單用組比較有顯著性差異。體內(nèi)裸鼠荷瘤實驗表明：與陰性對照組相比,DLJ14單用（4mg/kg,8mg/k... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
    1. 凋亡通路阻滯與MDR
        1.1. 內(nèi)源性細胞凋亡途徑
        1.2. 外源性細胞凋亡途徑
        1.3. 內(nèi)源性細胞凋亡途徑與外源性細胞凋亡途徑的相互聯(lián)系
    2. 細胞表面ABC超家族藥泵蛋白外排與MDR
實驗材料
    1. 化合物
    2. 細胞株及其培養(yǎng)
    3. 實驗動物
    4. 試劑
    5. 儀器設(shè)備
實驗方法
    1. DLJ14和阿霉素合用對MCF-7/A細胞線粒體凋亡通路的影響
        1.1. 腫瘤細胞生長抑制實驗
        1.2. 裸鼠皮下移植瘤生長抑制實驗
        1.3. Hoechst 33258染色實驗
        1.4. Annexin-FITCV/PI雙染法檢測細胞凋亡實驗
        1.5. 細胞周期檢測
        1.6. 線粒體膜電位檢測
        1.7. 細胞線粒體蛋白和胞漿蛋白的分離提取
        1.8. Western blotting法檢測相關(guān)蛋白的表達
    2. DLJ14和阿霉素合用對MCF-7/A細胞中ABC超家族耐藥相關(guān)蛋白P-gp和BCRP的影響
        2.1. 羅丹明123的胞內(nèi)蓄積
        2.2. 細胞內(nèi)ATP含量檢測
        2.3. ATPase活性測定
        2.4. Western blotting法檢測P-gp和BCRP蛋白的表達
數(shù)據(jù)分析
實驗結(jié)果
    1. DLJ14和阿霉素合用對MCF-7/A細胞線粒體凋亡通路的影響
        1.1. DLJ14增強阿霉素對耐阿霉素細胞株MCF-7/A體外生長的抑制作用
        1.2. DLJ14增強阿霉素對耐阿霉素細胞株MCF-7/A裸鼠體內(nèi)移植瘤生長的抑制作用
        1.3. DLJ14增強阿霉素對EGFR/PI3K/Akt細胞信號通路的抑制作用
        1.4. Hoechst 33258染色法檢測DLJ14與阿霉素合用誘導(dǎo)MCF-7/A細胞凋亡的形態(tài)學變化
        1.5. Annexin V-FITC/PI染色法檢測DLJ14與阿霉素合用誘導(dǎo)MCF-7/A細胞凋亡的作用
        1.6. DLJ14與阿霉素合用后影響MCF-7/A細胞凋亡相關(guān)蛋白的表達
        1.7. DLJ14增強阿霉素誘導(dǎo)MCF-7/A細胞G2/M期阻滯作用
        1.8. DLJ14增強阿霉素誘導(dǎo)MCF-7/A細胞線粒體膜電位下降,促進cytochrome c從線粒體釋放到胞漿
    2. DLJ14和阿霉素合用對MCF-7/A細胞中ABC超家族耐藥相關(guān)蛋白P-gp和BCRP表達的影響
        2.1. DLJ14和阿霉素合用增加羅丹明123的胞內(nèi)蓄積
        2.2. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細胞內(nèi)ATP含量
        2.3. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細胞中Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase活性
        2.4. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細胞中P-gp和BCRP蛋白的表達
        2.5. DLJ14和阿霉素合用降低MCF-7/A細胞中ERK和P-ERK蛋白的表達
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文
學位論文評閱及答辯情況表


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3237957