近些年,隨著抗生素的廣泛使用甚至濫用,細(xì)菌耐藥性逐漸增加。耐藥性致病菌的傳播和感染嚴(yán)重危害人類健康,已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)的棘手問題。來源于不可培養(yǎng)土壤微生物Eleftheria terra的縮肽類抗生素teixobactin具有獨(dú)特新穎的雙重靶標(biāo)作用機(jī)制,即通過同時(shí)與細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖前體脂質(zhì)Ⅱ及壁磷壁酸前體脂質(zhì)Ⅲ的保守序列相結(jié)合來阻斷細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,對(duì)多種耐藥性致病菌具有顯著強(qiáng)效的抑制活性,包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）和結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis）等。這種特殊的作用方式使病原體對(duì)其很難產(chǎn)生耐藥性。因而,teixobactin作為一種對(duì)抗耐藥性致病菌的先導(dǎo)化合物在抗感染藥物研發(fā)方面顯示出巨大的潛力。Teixobactin結(jié)構(gòu)中的十三元環(huán)及稀有的非天然氨基酸L-allo-enduracididine（L-allo-End）的化學(xué)合成難度大,產(chǎn)量難以提升;其生物合成基因簇大（約52 kb）,其產(chǎn)生菌Eleftheria terrae不可培養(yǎng)。所以,本研... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?Ｔｅｉｘｏｂａｃｔｉｎ的化學(xué)結(jié)構(gòu)［５］??－＾５＾??

和ｆｃｃ〇２ｒａ。這兩個(gè)ＮＲＰＳ編碼基因共含有１１個(gè)模塊，其中每個(gè)模塊負(fù)責(zé)整合新生肽??鏈中的一個(gè)特定的氨基酸，最后通過＾丨ｅｉｌ與／ＶＴｈｒｓ的內(nèi)酯化反應(yīng)將線性肽鏈從??ＮＲＰＳ組裝生產(chǎn)線上釋放，如圖１－３所示。甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域（ＭＴ?ｄｏｍａｉｎ）存在??于第１模塊中，其負(fù)責(zé)ｉ）－Ｐｈｅ＾ｉＶ－甲基化。值得注意的是，ｆｃｃｏ２包含兩個(gè)串聯(lián)的硫??酯酶結(jié)構(gòu)域，這種結(jié)構(gòu)在ＮＲＰＳ中是很罕見的。研宄證明，兩個(gè)串聯(lián)硫酯酶在功??能上是可互換的，并且很有可能協(xié)同作用，代表了一種前所未有的ＮＲＰＳ酶學(xué)卸??載機(jī)制吹一些基因與加＞１和加２相鄰，它們的功能尚不清楚，這些基因可能涉??及調(diào)控、產(chǎn)物產(chǎn)出等Ｗ。??目前，ｔｅｉｘｏｂａｃｔｉｎ的生物合成研宄在很大程度上滯后于化學(xué)合成研宄。因此，??本課題對(duì)于ｔｅｉｘｏｂａｃｔｉｎ生物合成途徑的研究是非常有必要的。鑒于原始產(chǎn)生菌在??現(xiàn)有條件下不可培養(yǎng)，重構(gòu)ｔｅｉｘｏｂａｃｔｉｎ的生物合成基因簇進(jìn)行異源表達(dá)是實(shí)現(xiàn)??ｔｅｉｘｏｂａｃｔｉｎ生物合成的有效途徑。??７??

（如阿拉伯糖或鼠李糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子）［７〃３］或溫度敏感型質(zhì)粒（如ｐＳＣｌＯｌ）?［７４］??控制重組酶的表達(dá)。??Ｒｅｄ／ＥＴ同源重組工程有兩種主要類型，如圖１－４所示。ＲｅｃＥ／ＲｅｃＴ蛋白可以??髙效介導(dǎo)兩個(gè)線性片段發(fā)生同源重組，即線線重組（Ｌｉｎｅａｒ－Ｌｉｎｅａｒ?Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ??Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?ＬＬＨＲ）?；?Ｒｅｄａ／Ｒｅｄｐ蛋白可以高效介導(dǎo)環(huán)狀質(zhì)粒與線性片段發(fā)??生同源重組，即線環(huán)重組（Ｌｉｎｅａｒ－Ｃｉｒｃｕｌａｒ?Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ＬＣＨＲ）。??ＲｅｃＥ只與ＲｅｃＴ搭配工作，Ｒｅｄａ只和Ｒｅｄｐ搭配工作，ＲｅｃＥ與Ｒｅｄｐ或者Ｒｅｄａ與??ＲｅｃＴ搭配則不工作［７５］。如果底物是ｓｓＤＮＡ，則只需具有單鏈結(jié)合蛋白的Ｒｅｄｐ??或ＲｅｃＴ即可［７６］。??□?ＧＢ２００５??□?ＧＢ０５－ｐｉｒ?□?ＧＢ２００５??＾?１２．０００?°?＾??＾?５?丄?＋?１０．０００?－?Ｘ，??Ｊ?！脈?二?！?８．０００－?ｒ１??？ＰＣＲ?Ｉ，５°＇?．?－?ｐ＾ｐ－ｐｃａ?－?｜?ｅ．

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]Red/ET同源重組介導(dǎo)細(xì)菌人工染色體的快速修飾[J]. 王軍平,張友明,粟永萍.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(05)



本文編號(hào)：3130008