本文關(guān)鍵詞：吉非替尼按時(shí)辰給藥對荷瘤裸鼠的藥效學(xué)影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過對非小細(xì)胞肺癌移植瘤模型裸鼠時(shí)辰給藥,研究吉非替尼不同時(shí)間點(diǎn)給藥對腫瘤的抑制效果,并探討EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK通路討論其可能作用機(jī)制。方法:1.造模與分組:建立HCC827非小細(xì)胞肺癌荷瘤裸鼠模型,按照時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為六組(04:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00),每組各有實(shí)驗(yàn)組和對照組。2.給藥:實(shí)驗(yàn)組灌胃給藥吉非替尼混懸液,模型組給予相同量的體積分?jǐn)?shù)為1%的吐溫80溶液,連續(xù)給藥21天。3.藥效學(xué)指標(biāo)檢測:根據(jù)測量的腫瘤長徑和短徑,計(jì)算并繪制腫瘤體積生長曲線。第21天處死荷瘤裸鼠后,剝離腫瘤組織,稱取腫瘤重量,計(jì)算抑瘤率。4.基因表達(dá)檢測:用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中EGFR、AKT、m TOR和ERK1/2的信使RNA的相對表達(dá)量。5.蛋白表達(dá)檢測:western-blot檢測各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中P-EGFR、P-AKT、P-mTOR、P-ERK蛋白質(zhì)的相對表達(dá)量。6.細(xì)胞凋亡檢測:采用TUNEL染色法檢測腫瘤組織切片中腫瘤細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:1.與模型組相比,實(shí)驗(yàn)組各組荷瘤裸鼠腫瘤體積增長緩慢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與20:00組相比,4:00,8:00和12:00組生長較慢,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,除20:00外,實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤重量均比模型組要低(P0.05),腫瘤抑瘤率8:00組最高,20:00組最低。2.與模型組相比,4:00、8:00組EGFR mRNA的相對表達(dá)量比較低(P0.05),8:00組與16:00、20:00組比較表達(dá)量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00三個(gè)組中AKT m RNA的相對表達(dá)量降低(P0.05),8:00和12:00組與16:00、20:00、24:00組比較表達(dá)量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00組mTOR的mRNA的相對表達(dá)量降低(P0.05),4:00、8:00組與20:00組mRNA的相對表達(dá)量降低(P0.05);4:00、8:00、12:00組的ERK1/2 mRNA的相對表達(dá)量降低(P0.05),4:00、8:00組與20:00、24:00組相比表達(dá)量降低(P0.05)。3.與模型組相比,P-EGFR蛋白的表達(dá)在4:00、8:00、12:00和24:00明顯降低(P0.05);P-AKT蛋白在4:00和8:00的表達(dá)量明顯降低(P0.05);P-mTOR蛋白的相對表達(dá)量表達(dá)在4:00和8:00明顯降低(P0.05);P-ERK1/2蛋白表達(dá)在4:00、8:00、24:00表達(dá)量明顯降低(P0.05)。4.與模型組相比,4:00、8:00和12:00組腫瘤組織細(xì)胞凋亡率明顯高于其他組。結(jié)論:吉非替尼對荷瘤裸鼠的移植瘤具有抑制作用,并且呈現(xiàn)出明顯的時(shí)辰節(jié)律性的差異,4:00,8:00和12:00的抑制效果比16:00,20:00和24:00的好,其中8:00腫瘤抑制效果最好,20:00抑制效果最差,這種抑制作用產(chǎn)生的機(jī)制可能是通路抑制EGFR/AKT/mTOR和EGFR/ERK傳導(dǎo)通路的信號傳導(dǎo)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吉非替尼 時(shí)辰藥理學(xué) 藥效學(xué) 作用機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 第一章 非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤模型的建立及模擬時(shí)辰給藥實(shí)驗(yàn)11-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料11-12
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株11
• 1.1.2 試劑11
• 1.1.3 儀器11-12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法12-13
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)12
• 1.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇12
• 1.2.3 細(xì)胞傳代12
• 1.2.4 細(xì)胞收集12-13
• 1.3 動(dòng)物模型制作13
• 1.4 分組及給藥13-14
• 第二章 吉非替尼按時(shí)辰給藥對荷瘤裸鼠的藥效學(xué)影響14-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14
• 2.1.1 試劑14
• 2.1.2 儀器14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-16
• 2.2.1 腫瘤體積變化和抑瘤率計(jì)算14
• 2.2.2 腫瘤組織病理學(xué)檢測14-15
• 2.2.3 腫瘤組織細(xì)胞凋亡率檢測15-16
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-22
• 2.3.1 吉非替尼不同時(shí)辰點(diǎn)給藥對腫瘤體積變化和抑瘤率的影響16-18
• 2.3.2 吉非替尼不同時(shí)間點(diǎn)給藥荷瘤裸鼠移植瘤組織病理學(xué)檢測18-19
• 2.3.3 吉非替尼不同時(shí)間點(diǎn)給藥荷瘤裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡檢測19-22
• 2.4 討論22-23
• 2.5 結(jié)論23-24
• 第三章 吉非替尼按時(shí)辰給藥對荷瘤裸鼠的時(shí)辰藥理學(xué)作用機(jī)制的研究24-53
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料24-25
• 3.1.1 試劑24
• 3.1.2 儀器24-25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法25-31
• 3.2.1 qRT-PCR檢測相關(guān)基因表達(dá)25-28
• 3.2.1.1 腫瘤組織總RNA抽提25
• 3.2.1.2 RNA濃度與純度檢測25
• 3.2.1.3 逆轉(zhuǎn)錄25-26
• 3.1.1.4 qRT-PCR擴(kuò)增26-28
• 3.2.2 Western blot檢測荷瘤裸鼠腫瘤組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)28-31
• 3.2.2.1 組織中總蛋白質(zhì)提取28
• 3.2.2.2 蛋白質(zhì)濃度測定28-29
• 3.2.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）29-30
• 3.2.2.4 轉(zhuǎn)膜30
• 3.2.2.5 抗原抗體反應(yīng)30-31
• 3.2.2.6 顯影31
• 3.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-51
• 3.3.1 吉非替尼不同時(shí)辰給藥對荷瘤裸鼠腫瘤組織中相關(guān)基因表達(dá)的影響31-47
• 3.3.1.1 荷瘤裸鼠移植瘤組織內(nèi) EGFR m RNA 在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)32-36
• 3.3.1.2 荷瘤裸鼠腫瘤組織中AKT mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)36-40
• 3.3.1.3 荷瘤裸鼠腫瘤組織中mTOR mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)40-44
• 3.3.1.4 腫瘤組織內(nèi)ERK mRNA在不同時(shí)辰點(diǎn)的表達(dá)44-47
• 3.3.2 吉非替尼不同時(shí)間點(diǎn)給藥對荷瘤裸鼠移植瘤組織中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響47-51
• 3.3.2.1 荷瘤裸鼠腫瘤組織內(nèi)P-EGFR在不同時(shí)間點(diǎn)的相對定量表達(dá)結(jié)果47-48
• 3.3.2.2 荷瘤裸鼠腫瘤組織內(nèi)蛋白P-AKT在不同時(shí)間點(diǎn)的相對定量表達(dá)結(jié)果48-49
• 3.3.2.3 荷瘤裸鼠腫瘤組織內(nèi)P-mTOR在不同時(shí)間點(diǎn)的相對定量表達(dá)結(jié)果49-50
• 3.3.2.4 荷瘤裸鼠腫瘤組織內(nèi)P-ERK在不同時(shí)間點(diǎn)的相對定量表達(dá)結(jié)果50-51
• 3.4 討論51-52
• 3.5 結(jié)論52-53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 綜述58-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66-67
• 附錄 英文縮寫詞表67-68
• 致謝68-69

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  本文關(guān)鍵詞：吉非替尼按時(shí)辰給藥對荷瘤裸鼠的藥效學(xué)影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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