目的:研究苯并呋喃類(lèi)化合物--BF12[（E）-3-（6-甲氧基-2-（1-（3,4,5-三甲氧基苯基）乙烯基）苯并呋喃-5-基）甲酸]對(duì)宮頸癌細(xì)胞（SiHa、HeLa）和乳腺癌細(xì)胞（MCF-7、MDA-MB-231）增殖、凋亡的影響及機(jī)制初探。方法:（1）MTT試驗(yàn)對(duì)四種癌細(xì)胞進(jìn)行IC₅₀測(cè)定;（2）BF12處理后,PI檢測(cè)細(xì)胞周期分布,Western Blot（WB）及免疫熒光（IF）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)微管聚合情況;（3）小管成形實(shí)驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)BF12對(duì)腫瘤血管影響;（4）Hoechst觀察細(xì)胞形態(tài),Annexin V-FITC/PI檢測(cè)凋亡誘導(dǎo)作用;（5）WB檢測(cè)PI3K/Akt/mTOR通路及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá),Autodock vina軟件對(duì)BF12和PI3K（α、γ、δ、β）進(jìn)行分子對(duì)接,劃痕實(shí)驗(yàn)觀察乳腺癌細(xì)胞遷移情況;（6）IF、電鏡及WB檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞自噬現(xiàn)象。結(jié)果:（1）BF12對(duì)SiHa/HeLa/MCF-7/MDA-MB-231的IC₅₀分別是1.10/1.06/0.89/4.77μM;（2）BF12選擇... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

春銜锏腦-ray晶體結(jié)構(gòu)（PDB編號(hào):6G6W，分辨率：2.72）。人PI3K蛋白含有A和B兩條鏈，A鏈為催化亞基，B鏈為調(diào)節(jié)亞基。用PyMoL1.7.6提取其中的A鏈，分別含1單元的PI3Kα蛋白和1分子3K6配體結(jié)構(gòu)、1單元的PI3Kγ蛋白和1分子4FJ配體結(jié)構(gòu)、1單元的PI3Kδ蛋白和1分子EO5配體結(jié)構(gòu)。因在RCSBProteinDataBank中未找到PI3Kβ蛋白，故采用計(jì)算機(jī)模擬。接著使用AutodockTools1.5.6刪除水分子、添加極性氫和電荷，最后轉(zhuǎn)化為PDBQT格式。1.2.8.2配體結(jié)構(gòu)準(zhǔn)備首先用ChemDraw畫(huà)出BF12的結(jié)構(gòu)，然后轉(zhuǎn)化為三維結(jié)構(gòu)（圖1-3），用于分子對(duì)接。圖1-3BF12的平面(left)和立體(right)結(jié)構(gòu)Fig1-3Planar(left)andthree-dimensional(right)structuresofBF121.2.9WB實(shí)驗(yàn)1.2.9.1蛋白提取取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa和HeLa細(xì)胞以3105個(gè)/ml的密度均勻接種于六孔板，過(guò)夜后用BF12、CA-4和/或PTX處理細(xì)胞24h，每孔加入60μLRIPI裂解液（RIPI:蛋白酶抑制劑:磷酸酶抑制劑=100:1:1)，冰上裂解30min，用刮刀刮取細(xì)胞后移到1.5mLEp管中，間斷渦旋5次，每次30s，然后4oC,13000r/min離心10min，收集上清液，置于冰上備用。參考文獻(xiàn)[53,54]方法分別提取聚合態(tài)和游離態(tài)微管蛋白。藥物干預(yù)后，用預(yù)熱至37oC的微管蛋白緩沖液MTSB洗滌兩次，加入70μLMTSB，37oC恒溫箱避光裂解10min，刮刀刮取細(xì)胞，14000r/min室溫離心10min，取上清，即為游離態(tài)微管蛋白懸液。在剩余的沉淀中加入RIPA裂解液，冰上裂解30min，4oC,12000r/min離心20min，取上清，即為聚合態(tài)微管蛋白懸液。1.2.9.2蛋白定量（1）按照說(shuō)明書(shū)，取20μL25mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液+980μLPBS得到0.5mg/mL蛋白工作液。（2）按照現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，A液:B液=50:1配制適量BCA工作液。（3）蛋白濃度檢測(cè)蛋白工作液加入量如下表1-9。1.2.8.1受體結(jié)構(gòu)?

化合物BF12與CA-4處理SiHa和HeLa細(xì)胞24h后的細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]IL-35在乳腺癌浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中表達(dá)的臨床意義及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響[D]. 趙中華.山東大學(xué) 2016

碩士論文
[1]新型微管靶向解聚劑DHPAC對(duì)腫瘤微環(huán)境中血管生成以及擬態(tài)血管生成的抑制作用與機(jī)制研究[D]. 鞏福蓮.山東大學(xué) 2019
[2]ELB對(duì)乳腺癌的抗血管生成及生長(zhǎng)抑制作用研究[D]. 楊喜燕.鄭州大學(xué) 2019
[3]丹參酮Ⅰ通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬抑制腫瘤細(xì)胞增殖的體外研究[D]. 張英.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 2017
[4]微管蛋白抑制劑CombretastatinA-4的苯并[b]呋喃類(lèi)衍生物的合成及抗腫瘤活性研究[D]. 范曄.新疆醫(yī)科大學(xué) 2017
[5]抗VEGF單克隆抗體BD0801單藥及聯(lián)合5-FU體外抑制HCC細(xì)胞SMMC-7721增殖及抗血管生成作用的研究[D]. 羅諾.東南大學(xué) 2016
[6]新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機(jī)制研究[D]. 王靜靜.山東大學(xué) 2016
[7]細(xì)胞中微管結(jié)構(gòu)解聚的生物力學(xué)研究[D]. 潘英摯.蘭州大學(xué) 2016
[8]PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路生物標(biāo)記物狀態(tài)與乳腺癌二線抗HER2治療相關(guān)研究[D]. 杜歌.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2015
[9]新型茚并吡唑類(lèi)微管蛋白抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及活性研究[D]. 劉晏娜.山東大學(xué) 2015
[10]miR-200b對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖遷移和侵襲的影響及機(jī)制研究[D]. 鄭琴.大連醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3103549