探究miR-206/mi R-613對OATP1B1基因和蛋白表達的影響及其調控機制。通過生物信息學軟件預測可靶向作用于OATP1B1 mRNA 3’-UTR的mi RNAs;采用RT-q PCR和Western blot等分子生物學方法檢測mi R-206/mi R-613、OATP1B1 mRNA及蛋白表達水平;采用雙熒光報告基因法,研究mi R-206/mi R-613作用于OATP1B1表達的確切機制。結果發(fā)現,mi R-206/mi R-613種子序列與OATP1B1 mRNA 3’-UTR互補配對,具有較高的特異性,且它們之間形成的二級結構較為穩(wěn)定。與對照組相比,過表達mi R-206/mi R-613,Hep G2細胞中OATP1B1的蛋白表達水平分別下調24.7%、38.8%,反之,抑制其表達OATP1B1的蛋白表達水平分別上調25%、38.2%,而OATP1B1 m RNA表達均未發(fā)現明顯改變;與對照組相比,過表達或抑制表達mi R-206/mi R-613,pMIR/OATP1B1-WT報告基因熒光素酶活性分別下降35%、30%或增加33.1%、32.5%,而在OA... 

【文章來源】：藥學學報. 2016,51(12)北大核心

【文章頁數】：6 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    儀器與試劑
    生物信息學分析
    細胞培養(yǎng)
    寡核苷酸轉染
    RT-q PCR法檢測miR-206/miR-613及OATP1B1m RNA表達
    Western blot法檢測OATP1B1蛋白表達
    雙熒光素酶報告實驗
    統計學處理
結果
    1生物信息學分析
    2瞬轉miR-206/miR-613擬似物或抑制物到HepG 2細胞對mi R-206/mi R-613表達的影響
    3 miR-206/miR-613對HepG 2細胞OATP1B1 mR NA表達的影響
    4 mi R-206/mi R-613對Hep G2細胞OATP1B1蛋白表達的影響
    5過表達或抑制mi R-206/mi R-613對報告基因熒光素酶活性的影響
討論



本文編號：3008420