目的探討在小鼠小膠質(zhì)細胞BV-2中過表達Ghrelin對Aβ誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及細胞線粒體功能的影響及相關(guān)機制。方法應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)Ghrelin過表達載體感染小鼠小膠質(zhì)細胞BV-2,免疫熒光觀察感染效率,應(yīng)用RT-PCR及Western blot檢測慢病毒感染后細胞中Ghrelin mRNA和蛋白的表達水平;Aβ25-35預(yù)處理過表達Ghrelin的BV-2后,利用ELISA、CCK-8、AnnexinV FITC/PI流式細胞術(shù)及JC-1法和免疫組化實驗檢測炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平及細胞增殖、凋亡、線粒體膜電位及胞質(zhì)中ROS及Cyt-C的表達;電子顯微鏡下觀察過表達Ghrelin后,Aβ25-35對BV-2細胞中凋亡小體產(chǎn)生的影響;Western blot檢測上述處理后BV-2細胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表達。結(jié)果免疫熒光顯示慢病毒介導(dǎo)Ghrelin過表達載體的感染效率可達85%以上,慢病毒感染的BV-2細胞中Ghrelin mRNA和蛋白的表達顯著升高;ELISA及CCK-8、An... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2020,36(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

慢病毒感染對小膠質(zhì)細胞中Ghrelin表達的影響

流式JC-1檢測細胞線粒體膜電位實驗結(jié)果顯示與Control組BV-2細胞相比，BV-2+Aβ25-35組、Lv-Ghrelin+Aβ25-35組與LvNC+Aβ25-35組細胞的線粒體膜電位顯著下降（P<0.05），表明Aβ25-35可明顯破壞BV-2細胞線粒體膜電位；而與BV-2+Aβ25-35組細胞相比，Lv-Ghrelin+Aβ25-35組細胞線粒體膜電位明顯升高（P<0.05),Lv-NC+Aβ25-35組細胞無明顯變化（P>0.05），這表明Ghrelin可抑制Aβ25-35對BV-2細胞線粒體膜電位的破壞，見圖4。2.5 過表達Ghrelin對小膠質(zhì)細胞中ROS及Cyt-C表達的影響

電鏡下觀察過表達細胞中Ghrelin對小膠質(zhì)細胞中凋亡小體產(chǎn)生的影響（×7 200)


本文編號：2988351