目的:對蒽酮類抗生素zunyimycin C抗MRSA活性進行分析,為解析其活性機制提供實驗依據(jù)。方法:1:利用DNA重組技術(shù),構(gòu)建MRSA臨床分離株來源的編碼β-酮脂酰ACP合成酶II的目的基因fab F的原核表達質(zhì)粒p ET32a-fab F,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達菌株Rosetta（DE3）,構(gòu)建基因工程菌p ET32a-fab F-R;2:IPTG誘導基因工程菌p ET32a-fab F-R異源表達重組蛋白r Fab F,SDS-PAGE檢測該目的蛋白是否表達,Ni-NTA親和層析技術(shù)純化重組蛋白r Fab F;3:利用熒光分光光度法,檢測zunyimycin C與重組蛋白r Fab F相互作用后熒光淬滅情況,初步確定zunyimycin C是否通過Fab F發(fā)揮作用;4:測定zunyimycin C對MRSA臨床分離株的MIC及MBC值,確定MRSA臨床分離株對zunyimycin C敏感與否及耐藥性;5:應用薄層色譜法檢測zunyimycin C在SD大鼠體內(nèi)的半衰期等藥代動力學指標;6:利用MRSA感染SD大鼠模型,檢測zunyimycin C對致死量MRSA感染SD大鼠的治... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Zunyimycins系列抗生素及其結(jié)構(gòu)類似物Fig.1Zunyimycinsandstructralanologues表1ZunyimycinC抗MRSA最小抑菌濃度（MIC）

圖 2. zunyimycins 可能的抗 MRSA 活性分子機制Fig.2 Possible anti-MRSAactivity mechanisms of zunyimycins現(xiàn)代組學技術(shù)的進步為研究人員快速解析新藥的作用分子機制提供了強有具[23]，尤其是在藥物的抗菌分子機制解析方面的研究取得了長足的進展，是抗制研究的重要工具[24,25]。研究者可以在轉(zhuǎn)錄組學（Transcriptomics）水平上研作用前后細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控變化情況，也可在蛋白Proteomics）水平上研究藥物作用前后或機體的蛋白質(zhì)表達差異，更可以在代（Metabolomics）水平上研究生物體（包括細胞、組織或個體）在藥物作用前致機體產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物的變化。如能將現(xiàn)代組學有機地結(jié)合起來，就可以及時水平、不同角度獲得藥物作用前后的基因表達、蛋白質(zhì)合成與修飾、代謝途徑變化最全面的信息，從而大大加快藥物作用機制的解析。綜上所述，蒽酮類抗生素 zunyimycin C 可能是通過抑制 MRSA 等革蘭氏陽菌的Ⅱ型脂肪酸合成酶系統(tǒng)而發(fā)揮抗菌作用。本研究將通過分子生物學手段，

A 來源的 fabF 基因片段 PCR 擴增R amplification of fabF from MR2000 DNA 分子量標準；1-6 泳道：目 進行 TA 克隆，通過抗性篩選 1000 bp 處有單一條帶（圖 隆菌株提取質(zhì)粒，質(zhì)粒經(jīng) B 1000 bp 處及 3000 bp 處出現(xiàn)段 fabF 成功與 T 載體連接，bpM1 2 3 4 5 6 7 8 920001000750500250

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長期施用四環(huán)素殘留豬糞對土壤中耐藥菌及抗性基因形成的影響[J]. 張俊,楊曉洪,葛峰,王娜,焦少俊,葉波平.  環(huán)境科學. 2014(06)

碩士論文
[1]鹵化聚酮類抗生素zunyimycins抑菌及抗腫瘤活性初步分析[D]. 王蔭蔭.遵義醫(yī)學院 2017



本文編號：2984920