研究背景與目的多藥耐藥（MDR）是指耐藥腫瘤對結(jié)構(gòu)與功能部分或完全不相關(guān)的抗腫瘤藥物表現(xiàn)顯著抗藥性。研究表明,多藥耐藥現(xiàn)象是導致惡性腫瘤化療失敗的關(guān)鍵原因�；熕幬锏呐R床廣泛應用過程中出現(xiàn)的多藥耐藥現(xiàn)象,嚴重限制藥物的治療效果與應用周期�？谇话┦且环N嚴重的、死亡率高的惡性腫瘤疾病。長春新堿（vincristine）是治療口腔癌的基礎(chǔ)化療藥物之一,多藥耐藥現(xiàn)象是降低長春新堿對口腔癌臨床療效的主要因素。與靶向紫杉醇類結(jié)合位點（如紫杉醇）或長春堿類結(jié)合位點（如長春新堿）藥物相比,靶向秋水仙堿結(jié)合位點的化合物可能具有克服P-gp調(diào)控的腫瘤多藥耐藥的化學結(jié)構(gòu)優(yōu)勢。6a是一種能與秋水仙堿結(jié)合位點展現(xiàn)高親和力的新型化合物。在本論文中,我們篩選了 6a對多種敏感株及其耐藥株腫瘤細胞的抗腫瘤活性,在此基礎(chǔ)上探討了 6a對長春新堿耐受的人口腔癌表皮樣細胞KB/V的生長抑制作用及分子機制。實驗方法1.6a對耐藥腫瘤細胞株的體外活性檢測。采用MTT法檢測多種耐藥細胞（BEL7402/5-FU,MCF-7,KB/V）的耐藥性,在確定細胞具有穩(wěn)定耐藥性的基礎(chǔ)上,采用MTT法、克隆形成方法檢測了 6a與秋水仙堿對多... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
    1. 腫瘤多藥耐藥性（ MDR）的現(xiàn)狀與治療策略
        1.1. P-gp與MDR
        1.2. P-gp與克服腫瘤多藥耐藥
        1.3. PTEN/Akt信號通路與MDR
    2. 長春新堿及其臨床應用現(xiàn)狀
        2.1. 長春新堿與口腔癌
        2.2. 長春新堿與腫瘤耐藥
    3. 微管蛋白抑制劑
        3.1. 微管蛋白抑制劑與細胞周期
        3.2. 秋水仙堿類微管蛋白抑制劑
    4. 本課題的研究內(nèi)容
實驗材料
    1. 化合物與藥物
    2. 細胞株
    3. 試劑
    4. 試劑配制
    5. 儀器設(shè)備
實驗方法
    1. 細胞培養(yǎng)
    2. 抗腫瘤耐藥細胞活性篩選實驗
        2.1. 耐藥倍數(shù)測定實驗
        2.2. 6a與秋水仙堿抑制耐藥細胞生長的活性篩選
    3. 細胞生長抑制實驗
    4. 克隆形成抑制實驗
    5. 裸鼠移植瘤生長抑制實驗
    6. 羅丹明123胞內(nèi)蓄積實驗
    7. 微管蛋白免疫熒光染色實驗
    8. 細胞周期檢測
    9. Hoechst 33342染色實驗
    10. Annexin V-FITC/PI雙染實驗
    11. JC-1染色檢測線粒體膜通透性實驗
    12. Western blotting實驗
        12.1 蛋白提取實驗
        12.2 電泳及顯影實驗
    13. 統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析
實驗結(jié)果
    1. 抗耐藥細胞株的活性篩選
        1.1. 耐藥倍數(shù)的測定結(jié)果
        1.2. 6a和秋水仙堿對耐藥細胞株的生長抑制作用
    2. 6a對KB細胞及KB/V細胞的生長抑制作用
    3. 6a抑制KB/V細胞的克隆形成
    4. 6a抑制裸鼠KB/V移植瘤的生長
    5. 6a對KB/V細胞內(nèi)耐藥蛋白P-gp功能和表達的影響
        5.1. 6a對KB/V細胞內(nèi)P-gp外排功能的影響
        5.2. 6a對P-gp蛋白表達水平的影響
    6. 6a抑制KB/V細胞內(nèi)微管蛋白的聚合
    7. 6a對KB/V細胞周期分布的影響
        7.1. 6a 誘導KB/V細胞G2/m期阻滯
        7.2. 6a調(diào)節(jié)KB/V細胞周期相關(guān)蛋白的表達
    8. 6a誘導KB/V細胞凋亡
        8.1. Hoechst 33342染色法觀察細胞核形態(tài)學變化
        8.2. Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測細胞凋亡作用
        8.3. 6a誘導KB/V細胞凋亡作用的機制研究
    9. 6a抑制KB/V細胞內(nèi)的PTEN/Akt/NF-κB信號通路
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文
學位論文評閱及答辯情況表



本文編號：2924739