癌癥是全球第二大死因,目前,化療仍然是癌癥最普遍的治療方法。在化療藥物中,紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥物在乳腺癌、肺癌、前列腺癌等實(shí)體瘤的治療中均顯示較好的療效。其中卡巴他賽是一種化學(xué)半合成紫杉烷類(lèi)小分子化合物,近幾年在前列腺癌治療方面廣泛應(yīng)用。然而,現(xiàn)在市售的卡他巴塞注射液在臨床應(yīng)用時(shí),一方面由于藥物在體內(nèi)分布不均,如在腸道細(xì)胞中蓄積,可導(dǎo)致嚴(yán)重腹瀉等胃腸道毒性,另一方面由于卡巴他賽的水溶性差,臨床處方中含有增溶劑聚山梨酯80,將產(chǎn)生嚴(yán)重毒副作用,限制了卡巴他賽的應(yīng)用。近年來(lái),白蛋白納米給藥系統(tǒng)由于其可提高難溶藥物的水溶性,且載體安全無(wú)毒、無(wú)免疫原性,可生物降解等優(yōu)點(diǎn)受到越來(lái)越多的關(guān)注。將卡巴他賽制備成白蛋白納米制劑可有效改善卡巴他賽的低水溶性問(wèn)題,避免了聚山梨酯80使用,降低毒副作用�，F(xiàn)有的白蛋白納米粒制備技術(shù)如去溶劑化法,Nab~(TM)法等均存在一定的問(wèn)題。這些方法操作復(fù)雜,可能影響到白蛋白的生物活性,另外有毒試劑及交聯(lián)劑的使用增加了制劑的毒性。相比而言,鹽析法可避免有毒試劑及交聯(lián)劑使用,利用白蛋白展開(kāi)與再折疊的自組裝方式形成納米制劑,保持白蛋白的生物活性且易于操作�；谏鲜霭椎鞍准{米粒與鹽析法的優(yōu)勢(shì),本文采用鹽析法制備卡巴他賽白蛋白納米粒(Cbz-NPs),并對(duì)其進(jìn)行制備條件優(yōu)化。根據(jù)臨床卡巴他賽注射液溶劑配方配制了卡巴他賽注射液(Cbz-Tween),以其為對(duì)比,對(duì)Cbz-NPs進(jìn)行體內(nèi)外評(píng)價(jià)及抗腫瘤研究。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.卡巴他賽及人血清白蛋白基本性質(zhì)研究建立了卡巴他賽體外分析方法學(xué)和人血清白蛋白體外分析方法,分別對(duì)卡巴他賽和白蛋白進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn),卡巴他賽在選擇濃度0.02~1.00mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,人血清白蛋白在選擇濃度0.10~6.40mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,精密度分別為1.56%和0.14%,回收率平均值分別為99.15%和97.78%,穩(wěn)定性的RSD分別為0.69%和0.24%,均符合藥典方法學(xué)要求。2.卡巴他賽白蛋白納米粒制備及條件優(yōu)化采用響應(yīng)面分析法考察制備過(guò)程中藥物與白蛋白比例、白蛋白pH值、分散體系溫度的影響,以包封率為指標(biāo)優(yōu)化Cbz-NPs的制備工藝。獲得的最優(yōu)制備條件為:藥物與HSA比例(w/w)為0.16,pH值為7.8,分散體系溫度為66℃,在該條件下,得到的Cbz-NPs包封率為52.95%。最終得到的Cbz-NPs粒度分布均一,粒徑為170.2±1.9nm,載藥量為5.07±0.38%。3.卡巴他賽白蛋白納米粒體外評(píng)價(jià)對(duì)Cbz-NPs進(jìn)行體外評(píng)價(jià)。Cbz-NPs凍干粉末為白色均勻粉末,復(fù)溶在生理鹽水中呈澄清的淡藍(lán)色液體。在差式掃描量熱分析中,Cbz-NPs沒(méi)有出現(xiàn)卡巴他賽化藥和白蛋白的特征吸收峰,說(shuō)明形成了新的物相。體外穩(wěn)定性及體外釋放實(shí)驗(yàn)中表明,其是一種穩(wěn)定的且具有緩釋效果的制劑。與Cbz-Tween相比,Cbz-NPs可以有效改善溶血性,適用于靜脈注射。采用人肺癌細(xì)胞A549和人前列腺癌細(xì)胞PC3進(jìn)行體外細(xì)胞毒性試驗(yàn),Cbz-Tween的溶劑在兩種細(xì)胞系中均即表現(xiàn)出了較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,細(xì)胞存活率分別僅為81.48±5.28%和77.53±5.38%,同時(shí),未載藥納米粒沒(méi)有細(xì)胞毒性,證明了其載體的安全性。4.卡巴他賽白蛋白納米粒體內(nèi)分析方法建立采用高效液相色譜法,以地西泮作為內(nèi)標(biāo),建立大鼠血漿中卡巴他賽的含量測(cè)定方法。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示,該方法日間及日內(nèi)精密度良好,在藥物低、中、高不同濃度下的提取回收率分別為98.41±1.33%、97.23±1.86%、98.20±3.24%,基質(zhì)效應(yīng)為104.62±5.99%、102.36±2.99%、101.43±8.01%。此外,同樣采用地西泮作為內(nèi)標(biāo)建立裸鼠心、肝、脾、肺、腎及腫瘤組織中卡巴他賽的含量測(cè)定方法。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示,卡巴他賽的含量在0.2~10.0μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R0.99),日間及日內(nèi)精密度范圍為2.19%~5.43%,在藥物低、中、高不同濃度下的提取回收率均大于95%,基質(zhì)效應(yīng)為100%左右。均符合生物樣品的分析要求。5.卡巴他賽白蛋白納米粒體內(nèi)評(píng)價(jià)通過(guò)從大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究,荷瘤裸鼠的藥物組織分布研究,荷瘤裸鼠體內(nèi)抗腫瘤的初步藥效學(xué)研究,組織切片觀察及細(xì)胞因子檢測(cè)等方面對(duì)Cbz-NPs進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià)。以Cbz-Tween為對(duì)比,Cbz-NPs注射組的藥物半衰期(T_(1/2)(h))提高了2.12倍,藥時(shí)曲線面積(AUC0-∞)提高了0.33倍,平均滯留時(shí)間(MRT0-∞)提高了0.24倍。建立裸鼠人前列腺癌PC3腫瘤模型,荷瘤裸鼠組織分布研究顯示,Cbz-NPs可有效降低藥物在心,脾,腎組織中的含量從而減小藥物毒性,然而在腫瘤組織中,雖然Cbz-Tween在注射后0.5h藥物濃度顯著高于Cbz-NPs組,而隨后藥物濃度隨時(shí)間增加而迅速下降,然而Cbz-NPs在腫瘤部位藥物持續(xù)釋放積累,有效提高腫瘤部位的藥物含量。因此,在荷瘤裸鼠的體內(nèi)抗腫瘤研究中,Cbz-NPs及Cbz-Tween均可以顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng),抑瘤效果接近。通過(guò)體重、臟器病理切片、細(xì)胞因子變化評(píng)價(jià)Cbz-NPs與Cbz-Tween毒性,Cbz-NPs治療可通過(guò)高通透性和滯留效應(yīng)(EPR)達(dá)到被動(dòng)靶向,有效針對(duì)腫瘤組織,明顯改善Cbz-Tween帶來(lái)的肝臟腎臟毒性及損傷。綜上,本文通過(guò)鹽析法制備得到的一種具有良好粒徑分布、包封率的Cbz-NPs制劑,解決了卡巴他賽低水溶性問(wèn)題。同時(shí),相比于Cbz-Tween,Cbz-NPs可以明顯減小肝臟腎臟毒性,降低毒副作用,具有較好的應(yīng)用效果和發(fā)展前景。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R943;R96
【部分圖文】：

同微管蛋白的表達(dá)差異，微管束形成的減少、bcl-2 表達(dá)過(guò)表達(dá)等[9]。賽簡(jiǎn)介賽結(jié)構(gòu)式及理化性質(zhì)賽是 Sanofi-aventis 公司研發(fā)的前列腺癌的二線藥物，是一小分子化合物�？ò退悶榘咨蝾�(lèi)白色粉末。本品幾卡巴他賽分子式為 C45H57NO14，分子量為 835.93�；衔飳�(duì)于一個(gè)繼紫杉醇（Taxol or Paclitaxel）和多西紫杉醇（之后獲批的紫杉醇類(lèi)抗腫瘤藥物品種，該品種對(duì)抗前列腺癥可能進(jìn)一步擴(kuò)大。

30圖 2.1 卡巴他賽標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.1 Calibration curve of cabazitaxel2.4.1.2 精密度試驗(yàn)卡巴他賽含量測(cè)定精密度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2.2 卡巴他賽峰面積的 RSD 值為1.56%。所以，該檢測(cè)方法測(cè)定的卡巴他賽含量的精密度較好。表 2.2 卡巴他賽含量測(cè)定的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2.2 Precisions of cabazitaxelNO 面積 RSD（%）

圖 2.2 人血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.2 Calibration curve of human serum albumin2.4.2.2 精密度試驗(yàn)人血清白蛋白含量測(cè)定精密度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2.5，人血清白蛋白峰面積的RSD 值為 0.14%。所以，該檢測(cè)方法測(cè)定的人血清白蛋白含量的精密度較好。2.4.2.3 回收率試驗(yàn)回收率試驗(yàn)結(jié)果如表 2.6 顯示，回收率為 97.78%，良好。2.4.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果如表 2.7 所示，本方法穩(wěn)定性良好，RSD 值為 0.24%，符合含量測(cè)定要求。
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本文編號(hào)：2854856