本文對來源于近海灘涂、紅樹林土壤和深海沉積物的海洋樣品進行分離純化,共得到真菌102株,放線菌132株,細菌10株。通過對所有菌株發(fā)酵產物的TLC和HPLC分析及生物活性篩選,最終選取了 3株不同來源的海洋微生物,包括海洋鏈霉菌SS17F,紅樹林海洋鏈霉菌HNA101,深海海洋細菌SHA4,并對其進行了系統(tǒng)的次級代謝產物及生物活性研究。采用不同發(fā)酵方式對上述三株海洋微生物進行發(fā)酵培養(yǎng),通過乙酸乙酯對發(fā)酵產物進行提取,綜合運用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、MPLC、HPLC等方法對提取物進行分離純化,運用NMR、LC-MS等技術對單體化合物的結構進行解析,并結合X-ray單晶衍射、ECD、Mosher、Marfey法等技術手段闡明了新化合物的立體構型。在菌株SS17F的不同發(fā)酵產物中分離得到17個化合物,其中新化合物5 個,分別是lactoquinomycin D(13)和thioquinomycins A-D(14-17)。從菌株HNA101的不同發(fā)酵產物中分離得到25個化合物,其中包括1 1個新化合物,2-methoxy-xanthorrhorrhoeol(22),EIQ(27),alokicenones A-I(34-42)和 1 個新的天然產物2-hydroxy-xanthorrhorrhoeol(20)。在菌株SHA4的次級代謝產物中分離得到12個化合物,包括1個新化合物acantimycic acid(54)和1個新的天然產物7-hydroxy-2H-1,4-benzothiazin-3(4H)-one(44)。活性研究顯示,化合物14-17表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤及蛋白激酶抑制活性化合物�；衔�34和35表現(xiàn)出了顯著的抗腫瘤活性和蛋白激酶抑制活性,對人結腸癌細胞SW620和HCT116的IC50值在0.63-3.49 μM之間�；衔�54具有神經保護作用。研究發(fā)現(xiàn),采用高氏一號液體培養(yǎng)基發(fā)酵時,具有培養(yǎng)周期短,微生物生長及代謝產物穩(wěn)定等優(yōu)點;而采用大米固體培養(yǎng)基發(fā)酵時,微生物次級代謝產物的產率及豐富度明顯增加,更容易獲得新的天然產物。
【學位單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R915
【部分圖文】：

邐邐逡逑培養(yǎng)基邐質量比邐海鹽水（２．５。／。）逡逑＾邐４０ｇ邐６０邋ｍＬ逡逑②邐豆粕邐４０邋ｇ邐３０邋ｍＬ逡逑③邐大米：豆粕邐２０ｇ：２０ｇ邐５０邐ｍＬ逡逑④邐大米：麥麩邐２０ｇ：２０ｇ邐４０邐ｍＬ逡逑⑤邐豆粕：麥麩邐２０ｇ：２０ｇ邐３０邐ｍＬ逡逑將配置好的培養(yǎng)基，置于５００ｍＬ錐形瓶中，充分混勻，加塞封口后豎直放逡逑置于高壓滅菌鍋中，在１２１邋°Ｃ下濕熱滅菌２０ｍｉｎ，取出，自然冷卻后待用。逡逑將目標菌株少ｃｅｓ邋ｓｐ．邋ＳＳ１７Ｆ接種于上述８種培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基逡逑采用２８邋°Ｃ，邋１８０邋ｒ／ｍｉｎ搖床振蕩培養(yǎng)７天，固體培養(yǎng)基在２８邋°Ｃ恒溫室內靜置培逡逑養(yǎng)３０天。發(fā)酵完成后，液體培養(yǎng)基的發(fā)酵產物用等體積的乙酸乙酯進行萃取，逡逑固體培養(yǎng)的發(fā)酵產物則用乙酸乙酯浸提，每次浸泡２４小時；提取液經旋轉蒸發(fā)逡逑儀減壓濃縮并回收溶劑，所得浸膏即為不同培養(yǎng)基下的發(fā)酵產物。對各提取物進逡逑行ＨＰＬＣ邋（樣品濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）對比分析。逡逑ｕＶ（？１０Ｃ．０００＞邐ｕＶＩｘｌ邋．０００邋０００１邐逡逑

第２章海洋放線菌ＳＳ１７Ｆ次級代謝產物的研究逡逑結果顯示，采用高氏一號培養(yǎng)基作為液體培養(yǎng)基時，發(fā)酵培養(yǎng)所得的代謝產逡逑物更加豐富（圖２．１Ａ），且產率最高，抗腫瘤活性最好（圖２．２）。固體培養(yǎng)基逡逑中，大米培養(yǎng)基作為固體培養(yǎng)基時，產物更為豐富（圖２．１Ｂ），產率較高（圖逡逑２．２）；而采用豆粕作為培養(yǎng)基時，雖然也能在ＨＰＬＣ圖譜中觀察到較為豐富的逡逑產物，但由于豆粕自身的很多物質被提取出來，造成油脂含量偏高，粗提物的生逡逑物活性大大降低，也不利于后續(xù)代謝產物的分離；培養(yǎng)基中加入麥麩后，微生物逡逑的生長速度變慢，和單一培養(yǎng)基相比，代謝產物的豐富度和產率也都減少了。因逡逑此，選擇高氏一號液體培養(yǎng)基和大米固體培養(yǎng)基作為兩種不同的發(fā)酵方式，進行逡逑下一步的研究。逡逑■產率（ｍｇ／瓶）邐■抑制率／％邋（１０ｕｇ／ｍＬ）逡逑６０邐Ｈ邐Ｈ邐＾邐ｈ逡逑５０邐■－逡逑３0邋ｊ邋｜邋Ｊ邋■逡逑＼邋■，邋■邋ＭＭ，邋１，邋■，邋１Ｊ逡逑＾邋＾邋＾邋＾邋＃邋＃逡逑圖２．２不同培養(yǎng)基中菌株ＳＳ１７Ｆ發(fā)酵產物的產率和對腫瘤細胞ＮＣＩ－Ｈ１９７５的抑制率逡逑２．１．２不同發(fā)酵方式的研究逡逑進一步對兩種發(fā)酵方式進行對比

浙江大學碩士學位論文邐第２章海洋放線菌■Ｓｆｒｅｐｏｗｙｅ；邋ｓｐ．邋ＳＳ１７Ｆ次級代謝產物的研究逡逑此有必要對大米培養(yǎng)基的發(fā)酵周期進行探究。實驗中，保持溫度不變，以１０、逡逑２０、３０、４５和６０天為培養(yǎng)周期對菌株ＳＳ１７Ｆ在大米培養(yǎng)基中的代謝產物豐富度逡逑和產量進行評估（圖２．４）。結果表明，在不同的培養(yǎng)時間下，代謝產物豐度及產逡逑量呈現(xiàn)隨發(fā)酵時間先上升后趨于穩(wěn)定甚至略有降低的崷勢，結合肉眼觀察到的微逡逑生物生長狀態(tài)和大米培養(yǎng)基的消耗情況，最終確定菌株ＳＳ１７Ｆ在大米培養(yǎng)基中逡逑的最適宜培養(yǎng)周期為３０天。逡逑ｙｕｉｗａｗｉ邐逡逑

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本文編號：2821225