目的：建立SD大鼠血清、尿液固有成分標簽庫,用以區(qū)分內(nèi)源性代謝物與外源性物質(zhì),為大鼠灌胃四物湯后的代謝組學研究提供基礎(chǔ)；對大鼠進行單次和多次四物湯灌胃,展開血清、尿液代謝組學初步研究,探討正常大鼠灌胃四物湯后血清、尿液代謝物的變化,并以內(nèi)源性代謝物的變化情況探索四物湯的藥效機制。方法：本研究主要采用UPLC-QTOF MS技術(shù),對正常SD大鼠的血清、尿液成分進行檢測。首先,通過自主建立的Searcher軟件將實測結(jié)果與離線HMDB數(shù)據(jù)庫相匹配,進而建立包括大鼠血清、尿液成分全部實測數(shù)據(jù)及預鑒別化學結(jié)構(gòu)等多種信息在內(nèi)的SD大鼠血清、尿液固有成分數(shù)據(jù)庫;再利用UPLC-QTOF MS技術(shù)對單次和多次灌胃四物湯的SD大鼠血清、尿液進行檢測,將給藥組大鼠血清、尿液數(shù)據(jù)與空白組大鼠血清、尿液數(shù)據(jù)分別進行PCA, OPLS-DA分析,選取差異化合物與SD大鼠血清、尿液固有成分數(shù)據(jù)庫進行匹配；最后對通過一級質(zhì)譜精確質(zhì)荷比分析得到的預鑒別結(jié)構(gòu)進行與標準品比較,二級質(zhì)譜碎片分析,進一步驗證鑒別結(jié)果。結(jié)果：本研究建立了SD大鼠固有成分數(shù)據(jù)庫,不僅包含大鼠血清、尿液成分的全部實測數(shù)據(jù),還通過自主建立的預鑒別軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理。血清樣品在正離子模式下得到950個有效信號,其中155個信號可推測化學結(jié)構(gòu)；在負離子模式下得到1280個有效信號,其中190個可推測化學結(jié)構(gòu);得到15種經(jīng)多態(tài)離子互證的化學成分。尿液樣品在正離子模式下得到2260個有效信號,其中1060個可推測化學結(jié)構(gòu)；在負離子模式下得到3000個有效信號,其中1270個可推測化學結(jié)構(gòu)；得到92種經(jīng)多態(tài)離子互證的化學成分。七個不同時間點四物湯單次灌胃給藥后,在大鼠血清中共得到821種差異性成分,其中正離子模式下得到437種差異物,負離子模式下得到384種差異物。多次灌胃四物湯后,在大鼠血清中共得到182種差異性成分,正離子模式140種,負離子模式42種。通過與標準品比較和二級質(zhì)譜分析,進一步驗證了包含肌酸結(jié)構(gòu)的化合物,檸檬酸,11-脫氫皮甾醇等多種內(nèi)源性成分在血清中的含量發(fā)生了變化。單次和多次灌胃四物湯后的大鼠尿液中,正、負離子模式下共得到136種和77種差異化合物。通過二級質(zhì)譜分析進一步驗證了4-庚酮,癸二酸,3-Hydroxysebacic acid或2-Hydroxydecanedioic acid,甲基腺嘌呤,5-Hydroxy-6-methoxyindole glucuronide或6-Hydroxy-5-methoxyindole glucuronide, N-Acetyl-7-O-acetylneuraminic acid 及 Formylanthranilic acid或Noradrenochrome等多種成分在給予四物湯后在體內(nèi)的含量產(chǎn)生了變化。結(jié)論：本研究建立了SD大鼠血清、尿液固有成分數(shù)據(jù)庫,為進行四物湯灌胃后的大鼠代謝組學研究提供了前提條件,有效地區(qū)分了生物體內(nèi)源性成分與四物湯藥源性成分；鑒別并探討了多種灌胃四物湯后在大鼠血清、尿液中發(fā)生含量變化的內(nèi)源性成分及其生理意義,進一步推測了四物湯可能發(fā)揮的功效。本研究從內(nèi)源性代謝物含量變化的角度為探討四物湯的藥理作用提供了參考。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R965;O657.63
【部分圖文】：

２．３正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑２．３．１單次灌胃給藥大鼠血清樣品正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑圖１３Ａ－Ｇ是正離子模式（ＥＳ＋）單次灌胃７個給藥時間點下的給藥組與空白逡逑組大鼠血清樣品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。圖１４Ａ－Ｇ逡逑是負離子模式（ＥＳ－）單次灌胃７個給藥時間點下的給藥組與空白組大鼠血清樣逡逑品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。Ｓ圖中的每個點代表一個逡逑變量，即ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ上在某個保留時間出現(xiàn)的某個質(zhì)荷比信號的強度。橫逡逑坐標代表變量對模型的貢獻度，越向兩端分布貢獻度越大；縱坐標代表變量的可逡逑信度，也就是變量與組別的相關(guān)性，越向兩端分布可信度、與組別的相關(guān)性越大，逡逑取值在－１到１之間橫坐標和縱坐標的正方向代表空白組信號強于給藥組，逡逑負方向代表給藥組信號強于空白組。Ｓ圖中所標記的點，是橫坐標絕對值＞逡逑０．００１，縱坐標絕對值＞０．８，’為標準選擇出的差異性信號（ｍａｒｋｅｒ），共計８２１個，逡逑其中正離子模式（ＥＳ＋）邋４３７個，負離子模式（ＥＳ－）邋３８４個。正離子模式和負離逡逑子模式下的差異性信號（ｍａｒｋｅｒ）分別按不同趨勢下貢獻度（橫坐標）的絕對值逡逑由大到小編號。逡逑Ｂ邐５５－－Ｊ５逡逑Ａ邐＂邐祖吊１．Ｗ邋巧■邋５１逡逑：：邐：邐薩一－．逡逑■邋．．．逡逑：；邐邋邐邐

２．３．１單次灌胃給藥大鼠血清樣品正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑圖１３Ａ－Ｇ是正離子模式（ＥＳ＋）單次灌胃７個給藥時間點下的給藥組與空白逡逑組大鼠血清樣品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。圖１４Ａ－Ｇ逡逑是負離子模式（ＥＳ－）單次灌胃７個給藥時間點下的給藥組與空白組大鼠血清樣逡逑品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。Ｓ圖中的每個點代表一個逡逑變量，即ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ上在某個保留時間出現(xiàn)的某個質(zhì)荷比信號的強度。橫逡逑坐標代表變量對模型的貢獻度，越向兩端分布貢獻度越大；縱坐標代表變量的可逡逑信度，也就是變量與組別的相關(guān)性，越向兩端分布可信度、與組別的相關(guān)性越大，逡逑取值在－１到１之間橫坐標和縱坐標的正方向代表空白組信號強于給藥組，逡逑負方向代表給藥組信號強于空白組。Ｓ圖中所標記的點，是橫坐標絕對值＞逡逑０．００１，縱坐標絕對值＞０．８，’為標準選擇出的差異性信號（ｍａｒｋｅｒ），共計８２１個，逡逑其中正離子模式（ＥＳ＋）邋４３７個，負離子模式（ＥＳ－）邋３８４個。正離子模式和負離逡逑子模式下的差異性信號（ｍａｒｋｅｒ）分別按不同趨勢下貢獻度（橫坐標）的絕對值逡逑由大到小編號。逡逑Ｂ邐５５－－Ｊ５逡逑Ａ邐＂邐祖吊１．Ｗ邋巧■邋５１逡逑：：邐：邐薩一－．逡逑■邋．．．逡逑：；邐邋邐邐

圖１８巧j#酸標準品與信號７５在負離子模式下的選擇離子流圖和二級質(zhì)譜圖譜逡逑Ａ：巧j#酸標準品負離子模式下ＴＯＦ邋ＭＳ選擇離子流圖；Ｂ：信號７５負商子模式下ＴＯＦ邋ＭＳ逡逑選擇離子流圖；Ｃ；巧j#酸標準品二級質(zhì)譜圖譜；Ｄ：信號７５二級質(zhì)譜圖譜逡逑Ｆｉｇ邋１８邋Ｓｅｌｅｃｔｅｄ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ邋ａｎｄ邋ｉ＊ｅｌａｔｅｄ邋ＭＳ／ＭＳ邋ｏｆ邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ａｎｄ邋Ｓｉｇｎａｌ邋＊７５邋ｉｎ邋ＥＳ—逡逑Ａ：邋Ｓｅｌｅｃ化ｄ邋ｉｏ打邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｉｎｓ邋ｏｆ邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｉｎ邋ＥＳ—；邋Ｂ：邋Ｓｅｌｅｃ記ｄ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ邋ｏｆ邋Ｓｉｇｎａｌ邋７５逡逑ｉｎ邋ＥＳ—；邋Ｃ：邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｒｅｌａ化ｄＭＳ／ＭＳ；邋Ｄ：邋Ｓｉｇｎａｌ邋７５邋ｒｅｌａ化ｄＭＳ／ＭＳ逡逑，巧邐巧Ｉ。逡逑ｒ．邋ｓ；；逡逑＂，邋Ａ：：逡逑’拍＜＾邐？巧邋１邋Ｋ邐，ｒ，扣’邐ｉ？．邋１，＂逡逑��？，２？邐，；》？：�。哼姡礤澹龋藻义希濉；�？，：》，邐b8心１邋廣＊’：邐：？；，《邐…：＂邐…產(chǎn)Ｐ逡逑，．，；口邐Ｉ邋ｊｒ－Ｍ－邐Ｐ邋…：逡逑：：巧；：邐ｐ＊．，．Ｔ邐化‘化邋ｐｍ逡逑２７！邋１ＳＴ邐巧邐ＭＵ＇＂逡逑—，逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2815666