【摘要】：腦膠質(zhì)瘤具有生長迅速,復發(fā)率高和侵襲性強等特性,是目前死亡率最高的幾類腫瘤之一。化學藥物治療是最常用的腦膠質(zhì)瘤治療手段,但是由于血腦屏障(BBB)的存在,大多數(shù)化療藥物難以穿透BBB遞送進入大腦,并且藥物對于腫瘤細胞不具有選擇性,限制了化療藥物對腦膠質(zhì)瘤的療效。藥物遞送系統(tǒng)是解決以上問題的策略之一,其中又以具有低免疫原性、低毒性、生物可降解、高生物相容性等優(yōu)點的脂質(zhì)體最為適宜,脂質(zhì)體表面含有豐富的官能團,能夠?qū)ζ涓男浴⑿揎椇笫蛊溥_到更優(yōu)的性質(zhì),如主動靶向腫瘤細胞以及通過部分之前不能通過的生物屏障等。八聚精氨酸(R8)是一種典型的細胞穿膜肽(Cell-penetrating peptide,CPPs),具有較強的細胞膜穿透能力和較強的陽離子特性,能夠與細胞表面的負電殘基形成氫鍵,在細胞膜電勢作用下穿過細胞膜。而且R8富含氨基,可以通過酰胺鍵與疏水基團(如脂肪酸、油酸等)連接進行修飾。轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)是一種糖蛋白,Tf作為腦靶向配體與TfRs具有較強的親和力,Tf修飾賦予脂質(zhì)體腦腫瘤靶向能力,遞送化療藥物進入腦內(nèi)達到靶向治療腦膠質(zhì)瘤的目的。基于以上研究背景,本文以化療藥物阿霉素(DOX)為模型藥物,構(gòu)建CPPs和Tf共修飾DOX脂質(zhì)體,賦予其穿過BBB、腫瘤細胞雙主動靶向及高效穿膜功能,首先,利用脂質(zhì)體表面的Tf介導脂質(zhì)體主動靶向BBB,當脂質(zhì)體與BBB足夠接近的情況下在CPPs的作用下,脂質(zhì)體高效穿過BBB,然后,在腦內(nèi)Tf介導脂質(zhì)體主動靶向腦膠質(zhì)瘤細胞,同樣,CPPs可以介導脂質(zhì)體穿過腫瘤細胞膜,最終,將DOX送達腫瘤細胞質(zhì)。本文具體圍繞DOX分析方法學的建立、CPPs修飾脂質(zhì)體的處方篩選及工藝優(yōu)化、性質(zhì)表征、CPPs和Tf共修飾脂質(zhì)體的制備及抗腦膠質(zhì)瘤活性研究等方面展開研究。具體研究結(jié)果如下:1.DOX分析方法學的建立:為了對DOX含量進行定量分析,本章建立了DOX體內(nèi)外分析方法學,并對方法學的各項性質(zhì)進行考察。首先,使用高效液相色譜(HPLC)對DOX分析方法的精密度、回收率、穩(wěn)定性進行研究,建立體外分析方法學。然后,建立超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC/MS/MS)檢測腦組織中DOX含量的體內(nèi)分析方法學,并對方法的準確度、精密度、回收率、基質(zhì)效應和穩(wěn)定性進行評價。結(jié)果顯示,HPLC方法可以在體外準確、精密分析脂質(zhì)體中DOX的含量,方法學滿足DOX體外定量分析要求;UPLC/MS/MS分析方法可以準確、精密定量分析腦組織中DOX的含量,分析方法可以排除腦組織中生物基質(zhì)對DOX檢測的干擾。UPLC/MS/MS分析方法學滿足DOX體內(nèi)定量分析的要求。2.OA-R8脂質(zhì)體遞送DOX系統(tǒng)的建立:本章對CPPs修飾脂質(zhì)體的處方和工藝進行優(yōu)化,以其得到理化性質(zhì)最優(yōu)的脂質(zhì)體進行下一步修飾。使用乙醇注入法結(jié)合硫酸銨梯度法主動載藥制備CPPs修飾的DOX脂質(zhì)體(R8PLP),以粒徑、包封率等作為評價指標對R8PLP中陽離子磷脂/OA-R8/ePC/膽固醇/DSPE-PEG2000之間的比例、陽離子磷脂種類、硫酸銨濃度及脂相/硫酸銨溶液的體積比等因素進行優(yōu)化。制備R8PLP的最佳條件為DOTAP作為陽離子磷脂,DOTAP/OA-R8/ePC/Chol/DSPE-PEG=20/25/18/32/3,脂相/水相=1/10,硫酸銨濃度為250μM,攪拌速度為300 rpm,注入速度為5.5 mL/min制備R8PLP;DOX主動載藥條件:選用藥脂比為1/10,在pH值為7.4、溫度45℃的條件下載藥時間30 min,完成R8PLP的載藥。3.OA-R8脂質(zhì)體遞送DOX系統(tǒng)的評價:本章主要對前文制備的R8PLP的體內(nèi)外性質(zhì)進行表征。首先,制備了用于腦部遞送DOX的R8PLP,然后,對R8PLP的理化性質(zhì)進行表征,體外抗腫瘤活性、細胞攝取進行相應評價。制備的R8PLP呈球形,表面光滑,分散性好,粒徑均一,粒徑大約為100 nm;R8PLP的ζ電位為14.71 mV;R8PLP在37℃和4℃條件下,在10.0%血清、PBS和去離子水中,48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好;凍干后的R8PLP在37℃和4℃條件下,在10.0%血清、PBS和去離子水中,48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。DOX、LP、PLP、R8LP、R8PL對U87和GL261細胞具有顯著的抗腫瘤活性,并且抗腫瘤活性具有時間依賴性;給藥24 h后,R8LP、R8PL活性顯著高于DOX、LP、PLP,推測OA-R8修飾可以提高DOX對U87和GL261細胞的抗腫瘤活性。最后,對R8PLP的BBB通過能力進行評價:與PLP相比,R8PLP在腦組織內(nèi)蓄積效果顯著,R8PLP中DOX在腦內(nèi)的藥時曲線下面積(AUC0.5-12h)為PLP的2.4倍。然而,R8PLP的半衰期(t_(1/2))與PLP相似(3.47 vs 3.94 h),這些結(jié)果表明,OA-R8修飾的脂質(zhì)體具有更好的BBB穿透性和腦組織蓄積能力。4.Tf和OA-R8共修飾脂質(zhì)體遞送DOX系統(tǒng)的建立及評價:本章在R8PLP的基礎(chǔ)上,討論了Tf含量對脂質(zhì)體靶向性與抗腫瘤效果的影響,建立了Tf和OA-R8共修飾脂質(zhì)體遞送DOX系統(tǒng)(Tf-R8PLP),并對其粒徑、血清中的穩(wěn)定性、包封率和藥物體外釋放性能進行評價。除此之外,分析了Tf-R8PLP的體外細胞攝取。建立了裸鼠膠質(zhì)瘤模型,并評估了Tf-R8PLP的體內(nèi)抗腫瘤功效。對Tf-R8PLP治療后,藥物在裸鼠體內(nèi)的組織分布和裸鼠器官(包括腦、心、臟、肝、脾、肺和腎)的病理學進行評價。Tf-R8PLP的最佳制備條件為R8PLP/Tf-PEG-DSPE的摩爾比例為1/100;Tf-R8PLP的粒徑為128.64 nm,ξ-電位為6.81 mV,Tf的濃度為16.15μg/mL;Tf-R8PLP具有球形結(jié)構(gòu),粒徑均一,Tf-R8PLP在血清中的穩(wěn)定性良好;Tf-R8PLP均呈現(xiàn)了控制釋放行為;Tf-R8PLP具有最高的腫瘤生長抑制率,Tf-R8PLP的體內(nèi)抗腫瘤活性顯著高于R8PLP和DOX;Tf-R8PLP組的小鼠生存時間(25天)均比生理鹽水組(20天)、DOX組(22天)和R8PLP組(24天)長,Tf-R8PLP對于腦膠質(zhì)瘤的治療具有顯著的效果。綜上所述,本文制備了具有BBB、腫瘤細胞雙主動靶向及高效穿膜功能的DOX脂質(zhì)體,該脂質(zhì)體理化性質(zhì)優(yōu)異,在體內(nèi)外均有較好的抗腫瘤效果。為治療腦膠質(zhì)的多功能脂質(zhì)體的臨床應用打下理論基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96
【圖文】：

是一種前體藥，可以口服（pH<7.0） 1.8 h[29]。pH＞7.0 時，替莫唑胺會分解唑-4-羧胺），簡稱 MITC。它能夠使種堿基烷基化所引起的無效錯配修復 DNA 單鏈斷裂，DNA 雙鏈斷裂，最終過程如圖 1.1 所示[19]。現(xiàn)在有很多科學究，華中科技大學的解圓圓在“載替莫瘤的作用”等方面進行了相關(guān)研究[30]，2/M 期，抑制細胞增殖，對 C6 細胞的果[30]。雖然替莫唑胺在腦膠質(zhì)瘤治療膠質(zhì)瘤患者帶來希望，但是替莫唑胺存而且替莫唑胺在甲醇中極微溶，在乙醇唑胺注射液的臨床應用帶來了較大的

DOX 是一種廣譜抗腫瘤活性的蒽環(huán)類抗生素，由鏈霉菌產(chǎn)生，具有強烈的細胞毒性作用[17, 18]，是目前應用最廣泛的抗癌藥物之一，對核酸具有很高的親和性，能插入核酸鏈的堿基對之間，抑制 DNA 的合成，從而抑制腫瘤的增長[33,34]。DOX 水溶性好，在使用過程中，不需要添加像聚氧乙烯蓖麻油或 Tween 80等助溶劑，因此，DOX 被廣泛用于腦膠質(zhì)瘤的治療。Chen 等[35]使用 DOX 作為化學藥物治療腦膠質(zhì)瘤，結(jié)果如圖 1.2 所示。體外實驗結(jié)果顯示，DOX 的濃度為 100 ng/mL 時，DOX 對 C6 細胞的抑制率為~60.0%，但是，小鼠平均生存天數(shù)為 19 天，僅高于空白組 2 天（17 天），而且，DOX 組小鼠的體重明顯降低。Zong 等[8]也選用 DOX 作為抗腦膠質(zhì)瘤藥物用于腦膠質(zhì)瘤的治療，體外實驗結(jié)果顯示，當 DOX 濃度為 3.125 μg/mL 時，C6 細胞的存活率為~50%，而且 C6 細胞對于 DOX 具有較強的攝取量。Gao 等[36]也使用 DOX 作為化學藥物治療腦膠質(zhì)瘤，出現(xiàn)了相似的實驗結(jié)果。

圖 1.3 cRGD-RCCM 的制備和治療腦膠質(zhì)瘤流程[50]Figure 1.3 cRGD-functionalized and reversibly core-crosslinked multifunctionalPEG-PCL micelles (cRGD-RCCMs) for highly potent and targeted gliomachemotherapy[50]除此之外，Singleton 等[51]也制備了納米膠束，負載帕比司他用來治療腦膠質(zhì)瘤。首先，在磁力攪拌下，將 P407 聚合物直接溶解到 CSF 中，制備 5%的 P407溶液，然后加入 0.5 mL 的 CHCl3，攪拌均勻后，將 CHCl3蒸發(fā)，最后，進行藥物裝載。結(jié)果顯示，制備的膠束藥物遞送系統(tǒng)具有較好的抗腦膠質(zhì)瘤效果，生存時間延長至 60 天[51]。雖然，基于膠束的 DDS 在腦膠質(zhì)瘤治療方面具有較好的效果，但是在制備膠束的過程中，均使用了有機溶劑，而在制備過程中，有機溶劑難以完全除去，這將對人體構(gòu)成一定的傷害[49]。1.3.2 基于納米粒的 DDS

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周永興;周舒;;卡氮芥與銅鐵制劑聯(lián)合用于抗腦膠質(zhì)瘤的動物實驗[J];中日友好醫(yī)院學報;1993年03期

2 崔玉瓊;楊海城;;中藥活性成分抗腦膠質(zhì)瘤作用機制研究進展[J];中醫(yī)藥信息;2013年03期

3 尉雙玲;王曉娟;竇長武;;Dendritoma抗腦膠質(zhì)瘤的免疫治療研究進展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志;2008年01期

4 李明軍;李英夫;吳雁;楊福義;王維峰;宣兆博;;氰基丙烯酸正丁酯納米載體促進紫杉醇粒抗腦膠質(zhì)瘤作用的實驗研究[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2015年02期

5 ;顱腦[J];中國醫(yī)學文摘(腫瘤學);2005年01期

6 竇長武;;樹突狀細胞介導的抗腦膠質(zhì)瘤的免疫治療進展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學院學報;2007年06期

7 馮大勤,黃祜鴻;抗CD_3單克隆抗體、rIL-2協(xié)同活化PBMC抗人腦膠質(zhì)瘤的體外實驗研究[J];廣西醫(yī)科大學學報;2005年02期

8 史泓瀏;陳忠平;;人樹突狀融合細胞誘導體外抗腦膠質(zhì)瘤活性的研究[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2004年03期

9 繆偉鋒;吳一平;喻永濤;姚建社;羊正祥;;載多烯紫杉醇的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾脂質(zhì)體的制備及其體外抗腦膠質(zhì)瘤的作用[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2013年12期

10 王勤;王傳棟;李紅梅;馬麗霞;劉陽;;抗腦膠質(zhì)瘤緩釋植入劑體外釋藥影響因素研究[J];中國藥學雜志;2012年19期

相關(guān)會議論文 前5條

1 梁英;陳璐;葉雪威;陳磊;Komal Anjum;宋騰飛;王文玲;顏世倫;連曉媛;張治針;;基于腫瘤代謝靶標的抗腦膠質(zhì)瘤海洋天然活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)和研究[A];第十二屆海洋藥物學術(shù)年會會刊[C];2015年

2 吳珊;趙凌舟;喬文禮;趙晉華;;131I標記的東亞鉗蝎氯毒素在抗腦膠質(zhì)瘤轉(zhuǎn)移中的作用[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學影像專業(yè)委員會第十五次全國學術(shù)大會暨上海市中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學影像專業(yè)委員會2017年學術(shù)年會暨《醫(yī)學影像新技術(shù)的臨床應用》國家級繼續(xù)教育學習班資料匯編[C];2017年

3 張治針;梁英;陳璐;葉雪威;陳磊;Komal Anjum;宋騰飛;王文玲;顏世倫;虞斯然;連曉媛;;基于腫瘤代謝靶標的抗腦膠質(zhì)瘤海洋天然活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)和研究[A];第十二屆海洋藥物學術(shù)年會會刊[C];2015年

4 錢嘉文;楊姣;鄧宇婷;張宇飛;駱菲菲;儲以微;;TLR1/2信號依賴的小膠質(zhì)細胞免疫學特征及抗腦膠質(zhì)瘤作用研究[A];第十屆全國免疫學學術(shù)大會匯編[C];2015年

5 謝江寧;宋素芬;李香;徐秀泉;;桑黃總?cè)频奶崛〖捌潴w外抗腦膠質(zhì)瘤U251活性[A];中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會第十六次全國急診醫(yī)學學術(shù)年會論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 記者 趙暉;南大研發(fā)出抗腦膠質(zhì)瘤藥物[N];天津日報;2017年

2 衣曉峰;光動力療法抗腦膠質(zhì)瘤機制被揭示[N];健康報;2007年

相關(guān)博士學位論文 前2條

1 王曦;細胞穿膜肽和轉(zhuǎn)鐵蛋白共修飾脂質(zhì)體遞送阿霉素系統(tǒng)及其抗腦膠質(zhì)瘤的研究[D];吉林大學;2019年

2 王琨;硒代胱氨酸及其衍生物的抗腦膠質(zhì)瘤機理及神經(jīng)保護機制研究[D];山東大學;2016年

相關(guān)碩士學位論文 前8條

1 韓明峰;基于狂犬病毒衍生肽的阿霉素腦靶向膠束的制備及其抗腦膠質(zhì)瘤的研究[D];中國醫(yī)科大學;2019年

2 陸敏丹;多功能納米粒子的構(gòu)建及其抗腦膠質(zhì)瘤研究[D];廈門大學;2017年

3 詹文剛;四味消瘤飲抗腦膠質(zhì)瘤血管生成的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2015年

4 朱麗華;病毒巨噬細胞炎性蛋白ⅡN端肽抗腦膠質(zhì)瘤作用及分子機制[D];蚌埠醫(yī)學院;2015年

5 劉小軍;新型噻唑烷酮化合物抗腦膠質(zhì)瘤的活性及其作用機制研究[D];山東大學;2011年

6 臧元帥;九味通竅湯抗腦膠質(zhì)瘤的有效部位篩選及作用機理研究[D];南京醫(yī)科大學;2015年

7 李春暉;樹突狀細胞瘤苗抗腦膠質(zhì)瘤作用的體外實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2004年

8 郭慶東;腦膠質(zhì)瘤患者抗膠質(zhì)瘤抗體的檢測和篩選[D];第四軍醫(yī)大學;2002年

本文編號：2788236