【摘要】：臨床上每個(gè)病人的病癥情況各不相同,對(duì)藥物在體內(nèi)的代謝會(huì)產(chǎn)生一定影響,因此治療方案也應(yīng)因人而異。某些病人由于吸收或代謝等因素,血藥濃度達(dá)不到有效濃度;也有病人由于藥物在體內(nèi)分解和消除較為緩慢,導(dǎo)致血藥濃度持續(xù)過高甚至出現(xiàn)毒副反應(yīng)。因此對(duì)血液中藥物的濃度監(jiān)測(cè)對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)研究有著重要意義。西妥昔(JMT101)屬于單克隆抗體藥物,它可以靶向誘導(dǎo)毒免疫效應(yīng)細(xì)胞,使其作用于表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)的腫瘤細(xì)胞,對(duì)結(jié)直腸癌有著顯著的療效。本課題以西妥昔(JMT101)為研究藥物,基于ELISA檢測(cè)方法進(jìn),建立了血清中藥物濃度的檢測(cè)方法,為西妥昔(JMT101)藥代動(dòng)力學(xué)研究提供技術(shù)支持。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示:該檢測(cè)方法的最低定量檢測(cè)限為40ng/mL,在40-4,000ng/mL的檢測(cè)范圍內(nèi)重復(fù)性良好,批內(nèi)精密度CV%≤10%,批間精密度CV%≤15%,準(zhǔn)確度Bia%≤15%,標(biāo)準(zhǔn)曲線批間重現(xiàn)性良好。除了準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)外,基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性、方法耐用性、稀釋線性等實(shí)驗(yàn)均符合藥物代謝研究的要求,與參比工藝比對(duì)一致性良好。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)目前同類型藥物日益增多,但與此相對(duì)應(yīng)的檢測(cè)技術(shù)卻相對(duì)薄弱。本研究對(duì)ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行了一系列的工藝優(yōu)化,包括對(duì)抗干擾試劑酪蛋白的工藝摸索,即高壓溫度為120°C,高壓時(shí)間為30 min,pH8.0在1MPa的條件處理酪蛋白為最適工藝。改進(jìn)偶聯(lián)工藝提升試劑性能和延長(zhǎng)有效讀數(shù)時(shí)間,成功將目前藥物代謝研究所用主流的進(jìn)口試劑進(jìn)行替代。通過改變緩沖液配方從而減少基質(zhì)效應(yīng)與鉤狀效應(yīng),提升了試劑對(duì)人抗鼠抗體(HAMA)、類風(fēng)濕因子(RF)、高含量的膽紅素、甘油三酯的抗干擾能力,同時(shí)將試劑靈敏度由過去的80ng/mL提高到了40ng/mL。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R969
【圖文】：

上海交通大學(xué)工程碩士學(xué)位論文表 1-1（續(xù)）名稱 小分子藥物 大分子藥物血清結(jié)合 白蛋白 特異載體蛋白檢測(cè)方法HPLC,LC 法等色譜法ELISA,CLIA 等免疫分析法由于體液中藥物及代謝產(chǎn)物含量極微，又與大量?jī)?nèi)源性成分相混雜，因此只析方法可靠才能保證分析結(jié)果準(zhǔn)確。ELISA 法以適用范圍廣、靈敏度高、選擇的檢測(cè)器的開發(fā)和應(yīng)用見圖 1-1，在諸多分析方法中后來居上，成為分析體內(nèi)藥謝產(chǎn)物不可缺少的手段之一。

底物被酶催化反應(yīng)，形成顯色產(chǎn)物（圖1-2）。顯色產(chǎn)物的濃度與待測(cè)物質(zhì)的量直接或線性相關(guān)，因此可直接進(jìn)行定量計(jì)算或定性分析。此方法具有快捷簡(jiǎn)便、高通量、結(jié)果重復(fù)性高的優(yōu)點(diǎn)，尤其是對(duì)于大

7圖 1-3 EGFR 的蛋白序列Fig. 1-3 Protein sequence of EGFRGFR 包被抗原為粉末狀固體，實(shí)驗(yàn)前需將粉末用純水分裝凍存。包被時(shí)，按一定比例用緩沖溶液稀釋至工8℃孵育過夜或 37℃孵育 2h。次日進(jìn)行封閉。，使用較高濃度的其他蛋白質(zhì)進(jìn)行再次包被的工藝過程板具有較強(qiáng)的吸附能力，不僅能吸附所包被的蛋白質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2785175