【摘要】：目的 惡性腫瘤是當今威脅人類健康的第一殺手，我國的癌癥發(fā)病率一直處于上升趨勢，腫瘤的治療是當今學者所研究的熱點之一。本文以具有抗腫瘤活性的蘆薈多糖為主藥、以天然無毒可降解的殼聚糖為載體、以葉酸作為配體采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒。并利用響應面法優(yōu)化蘆薈殼聚糖納米粒的制備工藝，同時考察蘆薈殼聚糖納米粒的表征和體外釋藥性能；修飾納米粒表面，在納米粒表面連接葉酸，使其具有靶向性，并用紅外吸收光譜檢測連接情況。通過使納米粒包載熒光染料異硫氰酸熒光素（FITC）來考察腫瘤細胞SMMC-7721對納米粒的攝取性能，證明偶聯(lián)葉酸的納米粒具有靶向性，因此攝取性能優(yōu)于普通非偶聯(lián)葉酸的納米粒。通過MTT法考察空白納米粒對腫瘤細胞SMMC-7721的毒性，證明納米粒的輔料無毒性；比較蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒及蘆薈原藥在體外對腫瘤細胞SMMC-7721的活力抑制作用，證明蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒與蘆薈原藥同樣具有抗腫瘤效應，同時證明了葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒因其具有的靶向性，優(yōu)于普通的蘆薈殼聚糖納米粒與蘆薈原藥。通過吖啶橙（AO）染色法，更加直觀的來說明空白偶聯(lián)葉酸殼聚糖納米粒載體的安全性、無毒性；包載蘆薈多糖的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對腫瘤細胞SMMC-7721增殖有明顯的抑制作用。 方法 采用離子交聯(lián)法來制備蘆薈殼聚糖納米粒。以藥物量與殼聚糖量比例、pH、攪拌速度作為考察因素，以納米粒的包封率為評價指標；采用響應面法研究響應值以及最佳變量的組合，篩選最佳處方工藝；并對蘆薈殼聚糖納米粒進行體外釋放研究。利用EDC與NHS來連接葉酸與納米粒并通過紅外來檢測葉酸與納米粒的連接情況。通過MTT實驗考察空白納米粒對細胞活力的影響并證明輔料的無毒性，比較蘆薈原藥、蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒三者對腫瘤細胞SMMC-7721的活力抑制作用。將納米粒包載熒光染料異硫氰酸熒光素（FITC），考察腫瘤細胞SMMC-7721對普通納米粒及偶聯(lián)葉酸納米粒的攝取情況。通過吖啶橙（AO）染色法，考察空白偶聯(lián)葉酸殼聚糖納米粒載體與包載蘆薈的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對腫瘤細胞增殖的影響。 結(jié)果 采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒大小較均一，結(jié)構(gòu)完整，為球形或類球形。蘆薈殼聚糖納米粒的制備采用響應面法設(shè)計并優(yōu)化后的處方工藝為：藥物量與殼聚糖量比例為0.14、pH為3.0、攪拌速度294r/min。以此條件制得的納米粒包封率與預測值偏差較小。蘆薈殼聚糖納米粒具有緩釋特性，體外釋放過程符合Ritger-Peppas模型。通過紅外吸收光譜檢測到葉酸與納米粒以連接偶合。MTT實驗結(jié)果表明蘆薈殼聚糖納米粒及葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖對腫瘤細胞SMMC-7721有明顯的抑制作用，空白納米粒對細胞幾乎無抑制作用。細胞對納米粒的攝取效果明顯，特別是偶聯(lián)葉酸的蘆薈殼聚糖納米粒更為突出。吖啶橙實驗的結(jié)果是空白的葉酸偶聯(lián)殼聚糖對腫瘤細胞的增殖無影響，包載蘆薈的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對細胞的增殖有明顯的抑制作用。 結(jié)論 采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒，并利用響應面法設(shè)計并優(yōu)化是可行的，納米粒具有明顯的緩釋特性，納米粒在腫瘤細胞中攝取良好，其中偶聯(lián)葉酸的納米粒的攝取更加明顯具有靶向性，對腫瘤細胞具有明顯抑制作用，輔料無毒性，具有很大的研究前景。
【學位授予單位】：遼寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R944.9
【圖文】：

薈多糖制成新的劑型可以更好的發(fā)揮蘆薈多糖的抗腫瘤活性。納米粒是尺寸小于 1000 nm 的納米粒子。一般由天然高分子材料通過化學材料交聯(lián)構(gòu)成，作為新型藥物傳遞系統(tǒng)納米粒是目前研究的熱點。納米粒由于其特殊的性質(zhì)已廣泛應用于抗腫瘤藥物的傳遞。一是因為腫瘤的血管壁間隙約為 100 nm，對尺寸小于 100 nm 的粒子具有生物通透性，因此包含抗腫瘤藥物的納米粒可以從內(nèi)皮組織血管中逸出進入腫瘤內(nèi)部而發(fā)揮療效[10]。二由于納米粒的尺寸很小可以被腫瘤細胞通過吞噬作用而攝取，從而有效避免了細胞膜對藥物轉(zhuǎn)運的限制。三是惡性腫瘤細胞膜的通透性增加，納米粒還可大大延長作用時間。四是將抗腫瘤藥物包裹于納米粒之中還避免了藥物與腫瘤細胞外耐藥蛋白的結(jié)合還有效抑制了腫瘤細胞的耐藥性。殼聚糖是自然界中唯一存在的堿性多糖，是甲殼素脫乙酰后的產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中其表面有氨基帶正電具有極性強、易結(jié)晶等特點[11]。殼聚糖的結(jié)構(gòu)如下圖所示

殼聚糖釋放率測定量適量采用優(yōu)化處方制備的冷凍干燥蘆薈殼聚糖析袋中，緊密封口，放入錐形瓶中。向錐形瓶中加 7.4），采用恒溫振蕩水浴法，溫度為 37±0.5 ℃，以釋放。分別于 0.5，1，2，4，6，9，12，18，2線方法計算多糖量，并每次補充 10 mL 新鮮磷酸鹽結(jié) 果外觀形態(tài)及粒徑持膜的銅網(wǎng)上滴加 1~2 滴蘆薈殼聚糖納米粒，自然00EX 透射電子顯微鏡觀察載藥納米粒的形態(tài)，見殼聚糖納米粒大小較均一，結(jié)構(gòu)完整，為球形或類

檢測波長的確立多糖可與濃硫酸發(fā)生作用，水解成單糖，并與苯酚進一步發(fā)，在一定紫外波長下具有特定吸收峰[26]。實驗以無水葡萄糖苯酚-硫酸法測定蘆薈中蘆薈多糖的含量。分別將葡萄糖水釋至一定濃度后，滴加 5%苯酚試液，振搖 1 min，迅速加in，在 400~600 nm 波長內(nèi)進行掃描。掃描結(jié)果如圖 4 所 處有最大吸收，而除蘆薈外的其他輔料在此波長下則不吸測波長的選擇及標準曲線繪制

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王祥珍;李英勇;孫顯斌;;蘆薈治療對子宮內(nèi)膜癌survivin表達的影響[J];廣東醫(yī)學院學報;2006年04期

本文編號：2768697