【摘要】：目的制備同時包封異煙肼(INH)和利福平(RFP)的聚乳酸羥基乙酸(PLGA)緩釋微球,優(yōu)化微球的制備工藝,研究微球在體內(nèi)外的釋藥性能,為以后臨床上骨關節(jié)結核病灶清除術后的治療提供實驗依據(jù)。方法1.異煙肼、利福平緩釋微球的制備及工藝優(yōu)化通過復乳溶劑揮發(fā)法(W/O/W)制備INH-RFP-PLGA微球,以載藥率、包封率為主要考察指標,應用單因素試驗考察油相PLGA濃度、外水相PVA濃度、藥物載體比、油水比、藥物之間等因素對微球載藥率、包封率的影響;再應用正交試驗篩選最佳工藝,以最佳條件制備INH-RFP-PLGA微球和單藥微球(INH-PLGA微球和RFP-PLGA微球)。2.緩釋微球在體內(nèi)外的釋藥研究將制備的微球分成雙藥微球組(INH-RFP-PLGA微球)及單藥混合微球組(INH-PLGA微球,RFP-PLGA微球)。分別裝入透析袋中,再注入PBS液,在水浴搖床中進行體外釋藥試驗;在體內(nèi)藥物緩釋研究將SD大鼠65只隨機分成雙藥微球組、單藥混合微球組、陰性對照組、空白對照組,將準備好的微球植入大鼠骶脊肌內(nèi),陰性對照組只做切開處理不植入任何微球,空白對照組不做任何處理。通過大體觀察、局部組織及靜脈血中藥物分布、生化指標檢測、組織形態(tài)學等方面觀察。采用高效液相色譜法(HPLC)檢測溶劑、肌肉及血漿中的藥物濃度。結果1.異煙肼、利福平緩釋微球的制備及工藝優(yōu)化篩選出的最佳工藝為油相PLGA濃度為150mg/ml,外水相PVA濃度為20mg/ml,油水比為1:10,藥物載體比為1:4。最佳工藝制備的INH-RFP-PLGA微球異煙肼和利福平的載藥率分別為(11.06±0.25)%和(14.78±0.60)%,包封率分別為(37.75±1.41)%和(57.40±0.95)%;單藥微球異煙肼和利福平的載藥率分別為(11.36±0.24)%和(15.12±0.54)%,包封率分別為(38.83±0.61)%和(58.46±1.45)%,單雙藥物微球INH和RFP的載藥率和包封率無顯著差異(P0.05)。凍干收集的微球,分散性良好,在電鏡下觀察其表面光滑、球形良好,微球的平均直徑為278±77μm。2.緩釋微球在體內(nèi)外的釋藥研究(1)緩釋微球體外的緩釋研究本研究制備的單雙藥物微球在體外平穩(wěn)緩釋45天,單藥和雙藥微球異煙肼24h體外累計釋放率(突釋率)分別為26.53%、27.75%,利福平24h體外累計釋放率為18.67%、19.26%;體外緩釋6天時,異煙肼累計釋藥率超過50%;體外緩釋15天時,RFP累計釋藥率超過50%;體外緩釋45天時,單藥混合微球組和雙藥微球組INH的累計緩釋率分別約90.27%和91.83%;RFP的累計緩釋率分別約72.96%和73.79%。比較兩組微球組間INH、RFP在體外緩釋各個時間點的累計釋藥率,兩組之間無顯著性差異(P0.05)。在1天、10天、45天時,通過比較兩組微球組內(nèi)INH和RFP的累計釋藥率,發(fā)現(xiàn)各個時間點INH累計釋藥率明顯高于RFP,有顯著性差異(P0.05)。比較兩組微球組內(nèi)INH和RFP階段釋藥率,發(fā)現(xiàn)前20天,INH階段釋藥率較RFP高,20天后RFP階段釋藥率較INH高。(2)緩釋微球體內(nèi)的緩釋研究不同時間點兩組微球組間INH和RFP在局部肌肉和血漿中的藥物濃度,兩組之間沒有統(tǒng)計學差異(P0.05)。4天時單雙藥物微球組肌肉和血漿中INH濃度達到最高,1w后藥物濃度逐漸趨于穩(wěn)定;而7天時RFP濃度達到最高。8w時局部肌肉中單藥混合微球INH、RFP的藥物濃度分別為0.44μg/g、0.73μg/g,雙藥微球INH、RFP的藥物濃度分別為0.43μg/g、0.75μg/g,仍大于各自10倍最低有效抑菌濃度(MIC)。比較同組微球中INH和RFP在肌肉和血漿濃度差,局部肌肉中的藥物濃度明顯高于血漿中藥物濃度,比較有顯著性差異(P0.05)。在1周時,單雙藥物微球組大鼠AST、ALT較陰性對照組和空白對照組有短暫升高,比較有顯著性差異(P0.05);Scr、BUN各組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05)。在4周時,四組大鼠肝腎功能檢測各項指標相互比較各組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05)。在1、4周時,四組大鼠肝腎組織病理檢查未見明顯損傷。結論1.篩選出的最佳工藝為油相PLGA濃度為150mg/ml,外水相PVA濃度為20mg/ml,油水比為1:10,藥物載體比為1:4;采用復乳溶劑揮發(fā)法制備同時包裹親水性和親脂性兩種藥物,相互不影響負載到微球中的含量。2.INH-RFP-PLGA緩釋微球在體內(nèi)外具有明顯的緩釋效果,藥物之間互不影響釋放,且微球中INH釋藥速度較RFP快;微球在體內(nèi)局部維持有效濃度8周以上,且不會對肝臟、腎臟功能造成明顯的損害。
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R943
【圖文】：

1.2 色譜條件Hanbon C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；流動相為甲醇：磷酸二氫鈉（0.04mol4.5）=75∶25，流速 1.0ml/min；柱箱溫度 30℃；檢測波長 264nm；進樣體積 20μ間范圍 15min。1.3 專屬性取配置好的 INH、RFP 標準液，采用上述色譜條件進行檢測，得到色譜圖 1（A）譜圖顯示 INH 在 3.22 分鐘出峰，而 RFP 在 6.54 分鐘出峰；取適量空白微球用二氯溶解，加入甲醇稀釋后，經(jīng) 0.22μm 微孔濾膜過濾后，進樣檢測，色譜圖如圖 1（示；將適量 INH、RFP 溶解于甲醇，離心后，經(jīng) 0.22μm 微孔濾膜過濾后，進樣檢圖 1（C）所示。通過比較上述色譜圖結果表明，制備微球所用輔料（PVA、PLGA）醇溶液均對異煙肼和利福平的色譜峰測定無干擾，說明該檢測方法專屬性符合要INH RFP

寧夏醫(yī)科大學碩士學位論文 材料與方法2.1.4 標準曲線建立將上面配置好的 INH、RFP 濃度分別為 0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、50μg/ml 的標準液液，用 0.22 m 膜過濾后各進樣 20 L按 2.1.2 項色譜條件測定峰面積，以藥物濃度(y)為縱坐標，藥物峰面積(x)為橫坐標進行線性回歸,繪制標準曲線，見圖 2，得異煙肼標準曲線方程：y = 2.2176x + 0.0815 R= 0.9995，利福平標準曲線方程：y = 2.0306x + 0.177 R2 = 0.9996。結果表明 INHRFP 在 0.50-50μg/ml 范圍內(nèi)線性關系良好。

精密稱取 3 份 10mg 微球，在避光條件下用 1ml 二氯甲烷將其溶解，待完全溶解后加入 10ml 的用流動相混合液，超聲粉碎 20min，稀釋液用 0.22 m 膜過濾后定容，按2.1.2 項色譜條件用 HPLC 檢測藥物峰面積，并將其代入標準曲線公式中計算出微球中藥物含量。按照以下公式計算微球的載藥率和包封率。以微球載藥率和包封率為主要考察指標，考查微球制備過程中油相 PLGA 濃度、外水相 PVA 濃度、油水比、藥物載體比及兩藥之間對微球載藥率、包封率的影響。圖 3 復乳溶劑揮發(fā)法制備 PLGA 微球的示意圖2.3 徽球載藥率與包封率的測定2.4 微球制備過程中的單因素考察

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