【摘要】：目的考察替格瑞洛在大鼠肝微粒體的酶動力學及其與CYP3A的底物藥物辛伐他汀、洛伐他汀及阿托伐他汀的相互作用,以期為臨床上替格瑞洛的合理使用提供科學依據(jù)。方法將替格瑞洛與大鼠肝微粒體進行體外共孵育,孵育一定時間后用含有內(nèi)標(地西泮,10 ng·mL~(-1))的甲醇終止反應,并沉淀蛋白,15000 rpm離心10 min后取上清液進行分析,采用LC-MS/MS法測定微粒體酶孵育體系中活性代謝產(chǎn)物AR-C124910XX的濃度,使用Prism5計算主要的酶促動力學參數(shù)K_m,V_(max)與CL_(int)。在得到K_m后,反應體系中底物替格瑞洛的濃度選擇為1/3K_m~3K_m范圍內(nèi)的三個濃度,辛伐他汀、洛伐他汀及阿托伐他汀的濃度范圍為1-100μM,通過體外大鼠肝微粒體代謝試驗研究其與替格瑞洛代謝性相互作用。使用SigmaPlot 12.3酶動力學模塊,根據(jù)Dixon公式計算辛伐他汀對替格瑞洛代謝的可逆性抑制常數(shù)K_i,并根據(jù)標準差值選擇最符合的模型。結果替格瑞洛在大鼠肝微粒體的代謝符合底物抑制的酶動力學,其轉化生成AR-C124910XX的K_m值為24.83μM,V_(max)為159.6 pmol·min~(-1)mg~(-1)protein。表觀清除率Cl_(int)為6.42 nL·min~(-1)·mg~(-1)protein;辛伐他汀顯著抑制替格瑞洛活性代謝產(chǎn)物的生成,其抑制符合競爭性可逆抑制,抑制常數(shù)Ki分別為5.8μM。洛伐他汀及阿托伐他汀對替格瑞洛呈現(xiàn)出中等強度的抑制作用,其抑制常數(shù)分別為11.4μM和10.3μM。結論1.替格瑞洛在大鼠肝微粒體的代謝符合底物抑制的酶動力學。2.辛伐他汀對替格瑞洛有顯著程度的代謝性抑制作用,洛伐他汀和阿托伐他汀對替格瑞洛有中等程度的抑制作用。臨床上替格瑞洛與他汀類藥物合用時尤其需要考慮其與辛伐他汀的相互作用。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96
【圖文】：

第二部分 結果1 AR-C124910XX 及內(nèi)標的色譜圖如圖1所示，在所選實驗條件下，替格瑞洛活性代謝產(chǎn)物AR-C124910XX與內(nèi)標（地西泮）的出峰時間分別為2.61min和2.80 min 。表明空白孵育體系中內(nèi)源性物質和相應代謝產(chǎn)物等均不干擾待測物及內(nèi)標的測定。活性代謝產(chǎn)物AR-C124910XX在2~500ng·mL-1內(nèi)線性關系良好。最低定量限為2 ng·mL-1。ABCD

圖 2 替格瑞洛體外孵育時最佳孵育時間（A）和酶蛋白濃度（B）的確定Fig.2 Determinationofmicrosomalincubationtime（A）andproteinconcentration（B）on therateofticagrelormetabolisminRLMs3 替格瑞洛在大鼠肝微粒體內(nèi)酶促動力學分析大鼠機體在攝入替格瑞洛后，該藥物在較短時間內(nèi)產(chǎn)生氧化代謝，生成AR-C124910XX。在底物濃度超過 100 μM 時，AR-C124910XX 的生成濃度反而降低，提示在替格瑞洛濃度高時，對 CYP3A 呈現(xiàn)出一定的抑制作用。替格瑞洛在大鼠肝微粒體中的酶促動力學結果如圖 3 所示。經(jīng)計算，求得大鼠肝微粒體中替格瑞洛發(fā)生氧化代謝生成 AR-C124910XX的主要酶促動力學參數(shù)。替格瑞洛轉化生成AR-C124910XX的Km值為24.83μM。因此，后續(xù)可逆性抑制實驗中底物替格瑞洛的濃度確定為 10，20，40 μM。替格瑞 洛 在 體 外 大 鼠 肝 微 粒 體 中 生 成 AR-C124910XX 的 Vmax為 159.6

圖 3 替格瑞洛體在大鼠肝微粒體的酶動力學Fig.3 Enzyme kinetics of ticagrelor in RLMs4 他汀類藥物對替格瑞洛的體外抑制作用初步的單濃度抑制實驗結果表明，辛伐他汀、洛伐他汀及阿托伐他汀均可明顯抑制AR-C124910XX的生成，10 μＭ時抑制率可分別達到58.48%、44.01%及45.59%。進一步的抑制研究表明，辛伐他汀對CYP3A介導的AR-C124910XX生成的抑制作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性，IC50值為5.45 μM，屬于強抑制劑；洛伐他汀及阿托伐他汀對CYP3A介導的AR-C124910XX生成的抑制作用呈現(xiàn)中等強度的濃度依賴性，IC50值分別為15.82和17.43 μM，屬于中等強度的抑制劑（圖4）。在更進一步的抑制機制研究中，在選用的三個底物濃度下，考察辛伐他汀的抑制效果，進行Dixon曲線擬合，其抑制常數(shù)Ki為5.8 μM，屬于競爭性可逆抑制（圖5）。

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本文編號：2747065