發(fā)布時(shí)間：2020-06-15 20:14

【摘要】：目的:以人類慢性粒細(xì)胞白血病(CML)細(xì)胞株K562為研究對(duì)象,探討三氧化二砷(ATO)對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響,并探討ATO對(duì)于Hedgehog(Hh)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)分子Gli1、Gli2、Smo和Ptch在mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,分析ATO影響Hh通路活性的可能機(jī)制,為將ATO應(yīng)用于具有Hh通路異常激活的CML提供可靠的理論依據(jù)。方法:(1)使用不同濃度的ATO作用于K562細(xì)胞48小時(shí),經(jīng)Annexin V-FITC/PI染色后,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ATO誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的效果。(2)采用免疫印跡(WB)技術(shù)檢測(cè)ATO對(duì)Hh通路分子Gli1、Gli2、Ptch2蛋白水平表達(dá)的變化以及對(duì)CML致病關(guān)鍵分子P210/Bcr-Abl表達(dá)的影響。(3)采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)ATO對(duì)于Hh通路分子Gli1、Gli2、Smo和Ptch在mRNA水平表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)經(jīng)不同濃度ATO處理48小時(shí)后,各實(shí)驗(yàn)組K562細(xì)胞均出現(xiàn)了凋亡現(xiàn)象,且隨著ATO的濃度的升高,凋亡效果越明顯,呈劑量依賴性。(2)ATO對(duì)于Gli2和P210/Bcr-Abl蛋白表達(dá)具有顯著的抑制作用,且抑制作用均呈劑量依賴性(P0.05);ATO對(duì)于Ptch2蛋白表達(dá)具有一定的促進(jìn)做用,但高劑量呈抑制作用(P0.05);ATO對(duì)于Gli1蛋白表達(dá)無(wú)明顯抑制作用。(3)ATO對(duì)于Gli1和Gli2 mRNA表達(dá)水平均具有顯著的抑制作用,且抑制作用均呈劑量依賴性(P0.05);ATO可以上調(diào)Ptch的mRNA表達(dá)水平(P0.05);無(wú)論任何濃度的ATO均未對(duì)Smo的mRNA表達(dá)水平產(chǎn)生影響(P0.05)。結(jié)論:(1)ATO對(duì)K562細(xì)胞具有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。(2)ATO可能是以Gli2蛋白為靶點(diǎn)抑制Hh通路活性,并通過(guò)降解P210/Bcr-Abl蛋白發(fā)揮作用。(3)ATO可能是通過(guò)抑制Gli1和Gli2的mRNA表達(dá)水平,上調(diào)Hh通路的抑制因子Ptch的mRNA表達(dá)水平,從而抑制Hh通路的異常激活。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96
【圖文】：

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文逡逑理過(guò)后，各實(shí)驗(yàn)組Ｋ５６２細(xì)胞均出現(xiàn)了不同程度的凋亡效應(yīng)，隨著ＡＴＯ濃逡逑度的升高，凋亡效果越明顯，呈藥物劑量依賴性（圖１）。同時(shí)結(jié)果顯示，逡逑Ｋ５６２細(xì)胞對(duì)于ＡＴＯ的敏感性不高，當(dāng)ＡＴＯ的濃度為１邋（＿ｉＭ、２ｐＭ時(shí)僅能誘逡逑導(dǎo)少量細(xì)胞凋亡，當(dāng)ＡＴＯ濃度達(dá)到４＾ｉＭ、８ｐＭ時(shí)的誘導(dǎo)凋亡作用明顯。逡逑邐邐邋邐邐邐邐邐、邐邐、」＇邋．ｉ邋邐邐邐逡逑％邐Ｖ；逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邐．邋０［ｊＭ邐ＩｍＭ逡逑Ｉ邐２邋丨邋＇邐■邐ｉ邋：逡逑０１邋ｍ邐＾邐＜ｉ１邋－ｏａ邋．邐＾邐？邋Ａ２逡逑｛P —、夏：逡逑—ｒ＂ｎ￣ｒｍＴ｜＂一邋ｔ？＊邐ＶＴＴＴＷ｜＊ｅ，＊Ｔｙ＊ｒＴＴｍｔｒ＇—＊ｆｒｍｒ｜￣Ｔ＇Ｔ＜ｒｙｒｒｐ￣￣￣ｒ￣ｒ￣Ｔ＊ｒｍｔｊ￣？ｒ＇＇逡逑５６＊邐ｗ＊邐ｒｒ邐ｘｆ＊邐＊ａＪ邐，８‘邐，９＊邐ｗ＊邐ｔｒ邐物４邐＜＃逡逑ＦＪＴＣＡ邐Ｆ１ＴＣ＜Ａ邐ＲｆＣ－Ａ逡逑邐邋＾０１３０３２＾－２邐邐邋邐Ｗ邋RG（Ｍ邐邋ｉ0ｌ邋１０３２０－８逡逑ｉY"—ｉＭ．——逡逑邐七邋ｒ—＞了—ｉ邋十逡逑ｆｍ－Ａ邐ｍ＾－Ａ邐ｍｃ－Ｍ逡逑圖１不同濃度ＡＴＯ在４８小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)Ｋ５６２細(xì)胞凋亡效應(yīng)逡逑Ｑ１區(qū)：（ＦＩＴＣ－Ａ）－／ＰＩ邋＋，該區(qū)域細(xì)胞為壞死細(xì)胞。逡逑Ｑ２區(qū)：（ＦＩＴＣ－Ａ）＋／ＰＩ邋＋邋，該區(qū)域細(xì)胞為晚期凋亡細(xì)胞。逡逑Ｑ３區(qū)：（ＦＩＴＣ－Ａ）－／ＰＩ－

Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ邋檢測(cè)邋Ｋ５６２邋細(xì)胞中邋Ｇｌｉｌ、Ｇｌｉ２、Ｐｔｃｈ邋以及邋Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ邋蛋白水逡逑平的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，ＡＴＯ對(duì)Ｈｈ通路的核心蛋白Ｇｌｉ２蛋白表達(dá)具有逡逑顯著的抑制作用，且該抑制作用呈藥物劑量依賴性（Ｐ＜0．０５）（圖２）。逡逑ＡＴＯ對(duì)于Ｈｈ通路的抑制因子Ｐｔｃｈ２的表達(dá)具有一定的促進(jìn)做用，但在高逡逑濃度ＡＴＯ作用下呈抑制作用，無(wú)劑量依賴性（Ｐ＞０．０５）（圖３）。但對(duì)于逡逑Ｇｌｉｌ這個(gè)蛋白，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在４８小時(shí)的作用時(shí)間中，無(wú)論何種劑量的逡逑ＡＴＯ均未對(duì)其蛋白表達(dá)水平產(chǎn)生顯著的抑制１邋乍用（Ｐ＞０．０５）（圖３）。不逡逑同濃度ＡＴＯ均對(duì)致病蛋白Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ的表達(dá)具有抑制作用，且該抑制作逡逑用呈藥物劑量依賴性，隨著ＡＴＯ濃度的增加，Ｐ２１０／Ｂｃｒ－Ａｂｌ的蛋白表達(dá)水逡逑平下調(diào)（Ｐ＜０．０５）（圖４）。逡逑ＧＩＰ邐１２邋３邋４逡逑ｇ邐．邐｜逡逑ｒａｔｉｏ邋（ＧＬＩ２Ｊ１３３－２４４ＫＤ逡逑■邐ｐ．５邋邐逡逑八邋一 一邐０４邋邐邐邐逡逑１邐：：邐Ｚ｜＝邐■—邋ｒ逡逑０：３ｈｒｌ：．逡逑１２３４逡逑Ｐ－ａａｉｉｒ．＇．邐邐逡逑，邐ｆ單Ｍ．邋ＩｆｉＭ邋２ｐＭ邋雄Ｍ邋ＡＴＯ逡逑４３—邐ｍｍｒｎ邐ｍｍ逡逑圖２不同濃度ＡＴＯ作用于Ｋ５６２細(xì)胞４８小時(shí)后Ｇｌｉ２蛋白的表達(dá)情況逡逑３５逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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1 裴衛(wèi)z

本文編號(hào)：2714938