【摘要】：紫杉醇(PTX)作為廣譜抗腫瘤藥物應(yīng)用廣泛,但它在治療過程中存在生物利用度低且會(huì)對(duì)正常組織產(chǎn)生毒性等缺陷。為了提高紫杉醇的生物相容性和降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性,將紫杉醇負(fù)載于納米顆粒進(jìn)行治療的研究已成為熱點(diǎn)。天然產(chǎn)物植物甾醇不僅具有抗腫瘤、抗氧化和降血脂等多種生理活性和良好的生物相容性,而且具有剛性疏水骨架,可以通過自組裝形成納米結(jié)構(gòu),然后裝載抗腫瘤藥物形成納米載藥體系,因此其可以作為載體運(yùn)送藥物達(dá)到更好的抗腫瘤效果。本研究以豆甾醇為結(jié)構(gòu)母核,通過共價(jià)鍵接枝3,3’-二硫代二丙酸,引入二硫鍵,繼而構(gòu)建具有多重刺激響應(yīng)性的納米載體,研究其對(duì)紫杉醇裝載釋放特性,并對(duì)納米載藥體系對(duì)HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容如下:利用豆甾醇的羥基與3,3’-二硫代二丙酸的羧基通過酯縮合共價(jià)連接合成豆甾醇衍生物(SD),利用薄層層析確定目標(biāo)產(chǎn)物的生成,采用柱層析對(duì)SD進(jìn)行分離純化,通過核磁氫譜和碳譜對(duì)SD進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,結(jié)果表明SD被成功合成。采用超聲乳化法制備豆甾醇衍生物納米顆粒(SDNs),通過掃描電鏡觀察其形貌,優(yōu)化乳化劑比例、有機(jī)溶劑種類和制樣方式,確定了SDNs的最佳制備條件為以四氯化碳為溶劑且四氯化碳:2.5%PVA=1:4(v/v)。掃描電鏡觀察到SDNs呈球形,粒徑分析儀測(cè)得SDNs平均粒徑為270±3.2 nm,Zeta電位為-22.1±0.3 mV。進(jìn)行紫杉醇納米載藥體系的構(gòu)建,制備了載藥納米顆粒SDNs@PTX,確定紫杉醇的最適投藥量為15%,載藥納米顆粒呈球形,SDNs@PTX的平均粒徑為315.9±2.6 nm,Zeta電位為-24.8±2.4 mV。通過高效液相測(cè)得納米顆粒對(duì)紫杉醇的包封率和載藥量分別為35%和4.56%。體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)表明SDNs@PTX對(duì)pH、谷胱甘肽和木瓜蛋白酶具有多刺激響應(yīng)性,在pH 5.6條件下,釋放量高于pH 6.7和pH 7.4組,隨著谷胱甘肽和木瓜蛋白酶量的增多,負(fù)載藥物的釋放量逐漸增大。體外實(shí)驗(yàn)研究SDNs@PTX對(duì)HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用。細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著時(shí)間增長(zhǎng),細(xì)胞吞噬的負(fù)載異硫氰酸熒光素的納米顆粒越多,呈現(xiàn)良好的時(shí)間依賴性;MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,相比于游離紫杉醇和單獨(dú)載體SDNs,SDNs@PTX對(duì)HT-29的抑制效果最好,其IC_(50)值為0.159μg/mL(以PTX當(dāng)量計(jì)),顯著優(yōu)于游離藥物PTX組(IC_(50)=4.337μg/mL);細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)加藥48h后,大量HT-29細(xì)胞死亡從六孔板壁脫落,表明SDNs@PTX具有良好的抗腫瘤效果。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96;TQ460.1
【圖文】：

技術(shù)路線

圖 3-4 SD 的核磁氫譜圖Fig.3-41H-NMR of SD in CDCl33.3.2 SD 核磁碳譜表征如圖 3-5 所示為 SD 的核磁碳譜，其結(jié)果分析如下：13C NMR (126 MHz, CDCl3) 177.09 (C-35), 171.23 (C-30), 139.67 (C-5),138.44 (C-22), 129.46 (C-23), 122.91 (C-6), 74.71 (C-3), 56.94 (C-17), 56.11 (C-14),51.38 (C-24), 50.21 (C-9), 49.84 (C-13), 42.37 (C-4), 40.62 (C-20), 39.78 (C-12), 38.24(C-1), 37.12 (C-10), 34.62 (C-33), 34.01 (C-34), 33.57 (C-8), 33.00 (C-25), 32.03 (C-2),29.04 (C-16), 27.92 (C-7), 25.58 (C-31,C-28), 24.87 (C-32), 24.51 (C-15), 21.70 20.80 (C-11,C-21,C-26), 19.46 (C-19), 19.14 (C-27), 12.38 (C-29), 12.20 (C-18).核磁碳譜選用的氘代試劑為氘代氯仿，其殘余溶劑峰為 77.16 ppm 處的三重峰以四甲基硅烷（TMS）作內(nèi)標(biāo)確定各峰的化學(xué)位移值。根據(jù)文獻(xiàn)[67]，化學(xué)位移值在 177.34 ppm 和 171.48 ppm 處的碳原子分別為未反應(yīng)端的羧基碳和反應(yīng)生成的酯基碳，表明目標(biāo)產(chǎn)物 SD 合成成功。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 袁久榮,張子忠,衛(wèi)云,孟凡杰;自動(dòng)多步展開儀分離測(cè)定北沙參中豆甾醇的含量[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2001年06期

2 馮文歡;吳正章;張鵬;常明;金青哲;王興國;;超聲輔助分步結(jié)晶法制備高純度豆甾醇的工藝研究[J];中國油脂;2019年10期

3 佘家Y

本文編號(hào)：2713793