【摘要】：本課題組經(jīng)過前期查閱大量文獻,開始設(shè)計路線并利用拼合原理合成出了一類新型芳雜環(huán)連三氮唑類衍生物。本論文通過MTT方法對該類衍生物做了活性篩選,發(fā)現(xiàn)序號為H27的化合物具有較好的抗腫瘤活性,為了進一步探索其生物機制,其抗腫瘤作用需要通過一系列實驗進行深入研究和評價。具體研究結(jié)果如下:1、通過MTT方法,分別用MGC803、PC3、EC109三株癌細胞篩選該系列衍生物的抗增殖活性,氟尿嘧啶作為陽性對照藥物,結(jié)果顯示化合物H27抗增殖活性最好。2、化合物H27對胃癌MGC803細胞的抗增殖效果非常明顯,其IC_(50)為7.59±0.28μM,而對人正常胃上皮細胞GES1毒性較小(IC_(50)為31.71±1.24μΜ)。3、通過細胞生長曲線和克隆形成實驗,發(fā)現(xiàn)化合物H27可以減緩胃癌MGC803細胞的生長速度,阻礙MGC803細胞的增殖,具有濃度-時間依賴性。4、將化合物H27以不同的濃度作用于胃癌MGC803細胞48小時,通過細胞周期試劑盒測定,結(jié)果表明化合物H27可以將MGC803細胞阻滯在G2/M期,從而阻滯癌細胞的過度增殖。Western Blotting實驗結(jié)果顯示:化合物H27能夠通過調(diào)節(jié)CyclinB1、CDK1、p21蛋白的表達將細胞阻滯在G2/M期。5、將化合物H27作用于MGC803細胞一段時間后,通過細胞的形態(tài)學(xué)觀察,我們發(fā)現(xiàn)細胞呈現(xiàn)出了凋亡的特征。6、將化合物H27以不同濃度作用于MGC803細胞48小時,然后通過FITC-Annexin V/PI試劑盒處理細胞,FCM結(jié)果顯示:隨著化合物H27濃度的增大,該細胞的凋亡百分比顯著增加。7、將化合物H27以不同濃度作用于MGC803細胞48小時,然后通過JC-1試劑盒處理細胞,FCM結(jié)果顯示:隨著化合物H27濃度的增大,MMP(Ψm)顯著降低。Western Blotting實驗結(jié)果顯示:化合物H27可以調(diào)控Bcl-2家族蛋白的表達以及激活Caspase-9、Caspase-3,對PARP進行切割,誘導(dǎo)細胞凋亡。8、將化合物H27以不同的濃度作用于MGC803細胞48小時,Western Blotting實驗結(jié)果顯示:化合物H27還可以通過外源性途徑激活DR4,再進一步激活Caspase-8促使細胞產(chǎn)生凋亡。9、劃痕實驗和Transwell實驗結(jié)果顯示:化合物H27可以顯著降低MGC803細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。Western Blotting結(jié)果顯示:化合物H27可以通過降低MMP-9和Vementin蛋白的表達抑制細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。綜上所述,本論文有效證明了新型芳雜環(huán)連三氮唑類衍生物H27對胃癌細胞具有較好的選擇性,特別是MGC803細胞,研究結(jié)果顯示化合物H27低濃度可以有效抑制MGC803的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移,高濃度導(dǎo)致細胞凋亡,為發(fā)掘抗癌藥物供應(yīng)了重要的候選化合物。
【圖文】：

目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)圖

目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)圖
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：2708161