【摘要】：腫瘤一直是危害人類健康的重要疾病之一,早期診斷是發(fā)現(xiàn)與治愈腫瘤的關鍵。目前,X射線計算機斷層掃描(X-ray-computed tomography,CT)是應用最多的的檢查腫瘤的方法。造影劑(contrast agents)能有效提高X射線成像對比度和清晰度,提高CT靈敏度。但目前使用的含碘造影劑對早期腫瘤診斷的靈敏度不高,因此,研制新型靶向特異性的CT成像造影劑具有重要的意義。Sigma-2受體在多種腫瘤細胞株中高豐度表達,可作為癌癥治療的潛在靶點�；衔颯V119能夠與sigma-2受體特異性結合,選擇其作為靶向運載體,偶聯(lián)三碘苯母核造影劑,得到新型靶向強化CT造影劑。通過競爭性實驗對新型造影劑與腫瘤細胞的親和性進行了探究。本論文在對現(xiàn)有碘造影劑結構進行對比分析后,設計了三種新型結構的三碘苯造影劑中間體化合物。同時設計了新的高效率合成靶向載體SV119的路線:利用一鍋法設計合成9-苯甲基-9-氮雜雙環(huán)[3.3.1]壬烷-3-酮,經(jīng)過還原等一系列反應,成功得到目標產(chǎn)物SV119。再分別與三個中間體偶聯(lián)得到三種新型靶向造影劑。通過元素分析、紅外、核磁共振等技術,對合成的化合物結構進行表征,結果顯示所合成的化合物SV119、三種造影劑及它們的偶聯(lián)體的化學結構與設計的目標結構一致。本課題組早期研究發(fā)現(xiàn),高表達sigma-1受體蛋白的乳腺癌細胞同時也高表達sigma-2受體蛋白,于是用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將閱讀框中包括有sigma-1受體基因的哺乳動物表達質(zhì)粒(pcDNA3.1-sigma-1)轉(zhuǎn)染到乳腺癌細胞MCF-7中,構建高表達sigma-2受體蛋白的工程株細胞MCF-7-sg1。用PCR法證實轉(zhuǎn)染的腫瘤細胞MCF-7-sg1基因組含有外來sigma-1基因;用western blot法證實MCF-7-sg1細胞成功表達目標產(chǎn)物,并通過對比分析,篩選出表達量最高的MCF-7-sg1工程細胞株,用作下一步研究。為了檢測所得到的新型靶向造影劑能否與腫瘤細胞特異性結合,本論文利用羅丹明B能發(fā)熒光的特性,使用DCC酯化法合成羅丹明B-N-羥基琥珀酰亞胺酯(RB-SE),進一步與SV119偶聯(lián)得到熒光探針RB-SV119。測定其熒光發(fā)射光譜,發(fā)現(xiàn)RB-SV119在激發(fā)光的作用下會發(fā)射熒光,可以作為熒光探針,用來研究造影劑與腫瘤細胞的親和性。用兩種能與sigma受體特異性結合的配體(AC927和BD1047)作競爭性試劑,通過它們與熒光探針RB-SV119競爭性結合MCF-7-sg1細胞表面的sigma-2蛋白,觀察細胞在激發(fā)光下的熒光發(fā)射情況,探究合成的熒光探針RB-SV119能與腫瘤細胞特異性結合。為研究合成的新型靶向造影劑與腫瘤細胞的親和性,進行造影劑、熒光探針與MCF-7-sg1細胞的競爭性結合試驗。先用合成的新型靶向造影劑孵育MCF-7-sg1細胞,再用熒光探針RB-SV119室溫孵育造影劑結合后的MCF-7-sg1細胞,通過對比觀察各組腫瘤細胞在激發(fā)光下的熒光發(fā)射情況,結果顯示靶向造影劑Ⅰ對腫瘤細胞的結合力較弱,而靶向造影劑Ⅱ、造影劑Ⅲ對高表達sigma-2受體的腫瘤細胞有較高特異性結合力,因此,造影劑Ⅱ、造影劑Ⅲ有望成為新一代高靈敏度CT靶向造影劑。
【圖文】：

溶 溶 難溶 溶 溶 難溶 溶 溶 RB-SE 的合成可選擇乙腈為溶劑。獲然后用乙醚/乙腈的混合溶液重結晶水、甲醇、乙醇、乙腈等，難溶于乙料，合成的不同氨基類化合物在酸，即出現(xiàn)酸式結構與堿式結構的平衡中熒光消失[116]。因此將合成的 RB-熒光的酸式結構產(chǎn)物。劑，原料 RB 與中間產(chǎn)物 RB-SE、，三個化合物 Rf值不同，由此可。

標記 Marker；Sigma-1：質(zhì)粒圖 4.1 Sigma-1 基因擴增電泳圖 DNA 擴增結果gh 脂質(zhì)體高效轉(zhuǎn)染試劑，，將閱表達質(zhì)粒（pcDNA3.1-sigma- sigma-2 受體蛋白的工程株細 DNA，以細胞基因組 DNA 應序列位于質(zhì)粒上，另一個引物能擴增和質(zhì)粒相對應的 sigm不能擴增。實驗中挑取多個克基因組 DNA 濃度不同，稀釋成擴增產(chǎn)物電泳圖譜中條帶的亮 Marker 與陽性對照組 1 的條0.7 kb，證明 sigma-1 基因成功
【學位授予單位】：中國計量大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R914

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