【摘要】：目的觀察雷帕霉素激活自噬對鈦顆粒誘導下骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)成骨能力的影響。方法分別以0、1、5、10、20、50、100nM濃度雷帕霉素培養(yǎng)C57小鼠BMSCs細胞48小時,CCK8法檢測不同濃度雷帕霉素處理后在各時間點的細胞活力,確定最佳作用時間及濃度;設(shè)置對照組,選用最佳濃度的雷帕霉素(10nM)處理骨髓間充質(zhì)干細胞24小時后western blot法檢測自噬相關(guān)蛋白Atg5、LC-3Ⅰ/Ⅱ表達水平,確定骨髓間充質(zhì)干細胞自噬情況;之后實驗分為4組:A組:成骨誘導分化培養(yǎng)基,B組:成骨誘導分化培養(yǎng)基+鈦顆粒,C組:成骨誘導分化培養(yǎng)基+雷帕霉素,D組:成骨誘導分化培養(yǎng)基+鈦顆粒+雷帕霉素。成骨分化培養(yǎng)各組細胞共21天,ALP含量在第7、14、21d時檢測,各組的鈣沉積用茜素紅染色法檢測;各組成骨分化相關(guān)蛋白Runx2和OCN的表達水平用western blot法檢測。結(jié)果10nM的雷帕霉素處理C57小鼠BMSCs24h時,細胞活力最佳;以10nM濃度的雷帕霉素處理BMSCs24h后,Atg5、LC3-Ⅰ/Ⅱ表達量較對照組明顯增高;B組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達水平較A組明顯降低(P0.05),C組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達水平明顯高于其余各組(P0.05),而D組ALP活性、鈣沉積量、Runx2和OCN表達水平較C組低(P0.05)。結(jié)論:鈦顆粒抑制骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨分化的能力,而雷帕霉素可有效減輕鈦顆粒對BMSCs成骨分化能力抑制,這可能與其增強骨髓間充質(zhì)干細胞自噬水平有關(guān)。
【圖文】：

寧夏醫(yī)科大學碩士學位論文 結(jié)結(jié)果1.雷帕霉素對 BMSCs 生長的最佳濃度和時間觀察為了確定不同濃度雷帕霉素對骨髓間充質(zhì)干細胞作用的最佳濃度及時間，我們使了 CCK8 法檢測細胞活性。加入濃度為 0nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM 的雷帕素，培養(yǎng)細胞于 12 小時、24 小時、36 小時、48 小時后收集并檢測。結(jié)果顯示，對 小鼠 BMSCs 生長的最佳工作濃度和最佳工作時間分別為 10nM 和 24h，差異有統(tǒng)計學意（P＜0.05），詳見圖 1。因此我們選擇此藥物濃度與作用時間處理細胞。

14圖 2 雷帕霉素對 BMSCs 自噬相關(guān)蛋白 Atg5、LC3-Ⅰ/ⅡA:Western blot 法檢測細胞 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表達水平Ⅱ蛋白水平半定量分析。1：對照組；2：雷帕霉素處理組。aPvs 1表 1 Atg5 和 LC3-Ⅰ/Ⅱ在 A 組、B 組中的比3.各組鈣沉積量比較A 組 B 組 Atg5 0.3908±0.03574 0.7250±0.02857 LC3-Ⅰ/Ⅱ 0.1816±0.01823 0.3348±0.1964
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R965

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曾巖,馬慶軍,郭昭慶,黨耕町,王志國,張慧珠;骨髓基質(zhì)細胞體外培養(yǎng)成骨能力的實驗研究[J];中華外科雜志;2003年10期

2 畢軍花;朱太詠;石印玉;;成纖維細胞的成骨能力[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年14期

3 王華松,陳莊洪,羅永湘;髓內(nèi)脂肪細胞對骨髓基質(zhì)細胞成骨能力的影響[J];中華實驗外科雜志;2005年07期

4 馬剛;骨髓的成骨能力[J];北京口腔醫(yī)學;1995年02期

5 鄭寶玉;江俊;陳玉玲;林敏魁;駱凱;閆福華;;人瘦素基因過表達增強大鼠骨髓基質(zhì)細胞成骨能力[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2017年02期

6 孫亮;李忠;馮衛(wèi)城;馬騰;王謙;薛漢中;盧代剛;路遙;張X;;骨不連斷端成骨能力區(qū)域劃分的臨床意義[J];骨科臨床與研究雜志;2017年03期

7 張志興;詹f，

本文編號：2686628