發(fā)布時間：2020-05-29 02:26

【摘要】：第一部分黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺對金黃色葡萄球菌生物被膜干預作用的體外研究目的:檢測受試的金黃色葡萄球菌菌株能否形成生物被膜,構建穩(wěn)定的體外生物被膜模型。探討黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺對體外構建的金黃色葡萄球菌生物被膜的干預作用。方法:廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院提供的由臨床分離獲得的MRSA 17546(t037型)為實驗菌株,采用剛果紅平板法定性該菌株能否形成生物被膜,同時采用硅膠膜作為建模載體,LB肉湯作為培養(yǎng)基,構建體外生物被膜模型,分別運用銀染法及掃描電鏡觀察體外構建的金黃色葡萄球菌生物被膜的形態(tài)結構。運用二倍稀釋法測定黃芩苷、利奈唑胺對MRSA 17546的MIC。在體外構建3天及7天的金黃色葡萄球菌生物被膜模型,在第3天及第7天加入藥物干預24小時,實驗分組如下:空白組、黃芩苷組、利奈唑胺組、黃芩苷+利奈唑胺組。采用連續(xù)稀釋法進行菌落計數(shù),結晶紫半定量測定生物被膜量,掃描電鏡觀察生物被膜的形態(tài)。結果:在剛果紅平板上生長的金黃色葡萄球菌菌落變黑,菌落外周的剛果紅培養(yǎng)基顏色消退,可定性受檢測的MRSA 17546為能形成生物被膜的陽性菌株。在24孔板里,LB肉湯作為培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)3天,采用銀染法處理,在光學顯微鏡下可見磨玻璃狀、云絮狀的生物被膜,透光欠佳。連續(xù)培養(yǎng)7天,銀染法處理后光學顯微下可見更加致密的團塊狀、云霧狀的生物被膜,透光度明顯減低。掃描電鏡觀察到在硅膠膜表面,連續(xù)培養(yǎng)3天,形成早期的生物被膜,可見粘稠的細胞外基質,生物被膜內(nèi)可見散在的金黃色葡萄球菌;連續(xù)培養(yǎng)7天,形成成熟的生物被膜,細胞外基質更多更粘稠,其中見較多的金黃色葡萄球菌。黃芩苷、利奈唑胺對MRSA 17546的MIC值分別為2048μg/mL、2μg/mL。連續(xù)稀釋活菌計數(shù)及結晶紫半定量測定生物被膜量結果顯示:無論是早期(3天)還是成熟(7天)的生物被膜,黃芩苷單獨干預組及利奈唑胺單獨干預組與空白對照組比較,差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05);但是黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺治療組與空白對照組、黃芩苷組、利奈唑胺組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。掃描電鏡顯示黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺組的載體表面生物被膜的細胞外基質及生物被膜內(nèi)的金黃色葡萄球菌明顯減少。結論:1、臨床菌株MRSA 17546能形成金黃色葡萄球菌生物被膜。2、以硅膠膜為載體,LB肉湯為培養(yǎng)基,MRSA 17546能在體外形成穩(wěn)定的金黃色葡萄球菌生物被膜。3、黃芩苷可破壞金黃色葡萄球菌生物被膜,可協(xié)同利奈唑胺進入生物被膜內(nèi)殺滅其中的金黃色葡萄球菌。第二部分構建金黃色葡萄球菌生物被膜的動物體內(nèi)模型目的:探討構建金黃色葡萄球菌生物被膜動物體內(nèi)模型,為后續(xù)藥物干預體內(nèi)實驗提供基礎。方法:以臨床分離獲得的MRSA 17546為實驗菌株,分別建立大鼠背部皮下羧甲基纖維素鈉空氣囊袋感染模型及硅膠膜植入大鼠背部的感染模型。在建模后不同時間點分別采用連續(xù)稀釋活菌計數(shù)法定量分析生物被膜內(nèi)細菌數(shù)量及掃描電鏡法觀察生物被膜的形態(tài)。結果:連續(xù)活菌計數(shù)表明:羧甲基纖維素鈉空氣囊袋感染模型的生物被膜內(nèi)細菌數(shù)量變化較大,硅膠膜植入模型構建的生物被膜膜內(nèi)細菌數(shù)量隨著時間延長處于相對穩(wěn)定。掃描電鏡觀察顯示:羧甲基纖維素鈉囊袋模型觀察到的較多粘稠樣物質,而且難以與細菌生物被膜區(qū)分開。硅膠膜植入模型載體表面可看見較典型的金黃色葡萄球菌生物被膜。結論:羧甲基纖維素鈉空氣囊袋感染模型及硅膠膜植入大鼠背部的感染模型均可成功模擬構建金黃色葡萄球菌生物被膜的動物感染模型。后一種模型更為簡便、穩(wěn)定。因此后續(xù)的藥物干預作用采用該模型。第三部分黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺對金黃色葡萄球菌生物被膜干預作用的體內(nèi)研究目的:探討黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺對體內(nèi)構建的金黃色葡萄球菌生物被膜的干預作用。方法:以廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床分離獲得的MRSA 17546為實驗菌株,建立硅膠膜植入大鼠背部感染模型。建模當天立即給與藥物干預,分為空白組、黃芩苷組、利奈唑胺組、黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺組。在建模后第1、2、3天采用連續(xù)稀釋活菌計數(shù)法進行定量分析,采用掃描電鏡觀察細菌生物被膜形態(tài),直接肉眼觀察背部局部組織炎癥反應表現(xiàn),硅膠膜周圍組織用HE染色后進行組織病理學觀察,腹腔采血后行炎癥因子PCT、CRP含量檢測。結果:連續(xù)稀釋活菌計數(shù)結果表明:給與藥物干預1天后,黃芩苷組、利奈唑胺組生物被膜內(nèi)細菌載量與空白組比較,差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺組與其它組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。藥物干預2天后,黃芩苷組與空白組比較,差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。利奈唑胺組與空白組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺組與利奈唑胺組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。藥物干預3天后,各組生物被膜量較前均有減少,黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺組與空白組及各單藥組單獨比較,差異具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。掃描電鏡觀察結果顯示:藥物干預作用1天后,空白組、黃芩苷組、利奈唑胺組載體表面可見較多的粘稠樣物質及細菌,彼此所見大致相同。而黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺明顯可以減少粘稠樣生物被膜形成,膜內(nèi)細菌明顯減少。藥物作用干預2、3天后,黃芩苷組載體表面生物被膜量與空白組相比仍沒有減少,利奈唑胺組載體表面粘稠樣物質及細菌比空白組、黃芩苷組有所減少,聯(lián)合藥物干預組載體表面看到的生物被膜及細菌明顯減少。肉眼觀察植入載體周圍組織結果顯示,給與藥物干預后,利奈唑胺可減輕植入物周圍組織充血、滲出、水腫等炎癥反應。黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺更能進一步減輕植入物周圍組織的急性炎癥反應,到第3天觀察到植入物周圍組織幾乎無充血、滲出。組織活檢HE染色觀察到聯(lián)合用藥組鏡下可見的炎癥細胞明顯減少,隨著時間推移,可見較多泡沫樣細胞及成纖維組織。腹腔采血測定炎癥因子結果表明,聯(lián)合藥物干預組能明顯減輕全身炎癥反應,CRP、PCT含量與單藥組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:黃芩苷聯(lián)合利奈唑胺能明顯破壞并減少大鼠體內(nèi)金黃色葡萄球菌生物被膜,可有效減輕生物被膜相關感染導致的炎癥反應。
【圖文】：

黃色葡萄球菌生物被膜干預作用的體內(nèi)外研究 結 果板法鑒定金黃色葡萄球菌形成細菌生物被膜附素(PIA)是金黃色葡萄球菌形成生物被膜的黑色，表明該菌株為能形成生物被膜陽性菌17546 在剛果紅瓊脂平板上生長的菌落變黑，，葡萄球菌生物被膜形成陽性菌株，如圖 1-1。

圖 1-2 銀染法觀察體外生物被膜(400×)bservation of biofilm in vitro by silver staining method ( magn鏡法：醫(yī)用硅膠模在 24 孔板培養(yǎng) 3 天，掃面被膜三維立體結構，在粘稠樣胞外基質中
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R965

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉嘯;王瑛瑛;羅剛;陳宇瑛;;無氟利奈唑胺的分離與合成[J];中國抗生素雜志;2015年12期

2 唐神結;肖和平;;利奈唑胺抗結核作用的研究及其最新進展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2010年01期

3 王穎;劉博;王文蕾;呂鵬;阿茹娜;;利奈唑胺治療血小板減少合并革蘭氏陽性球菌感染患者的療效分析[J];西北藥學雜志;2017年06期

4 王超;張金桂;覃業(yè)語;劉瑩;;利奈唑胺致低血糖1例[J];海峽藥學;2018年04期

5 王迪;許曉青;陳建達;蔡瑞娜;陳毅銓;;1例利奈唑胺致血小板減少的不良反應病例分析[J];中南藥學;2018年08期

6 朱林;;利奈唑胺治療老年人院內(nèi)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染的效果分析[J];中國當代醫(yī)藥;2013年32期

7 阿力古麗·阿不都外里;古麗仙丹木·阿皮孜;;利奈唑胺與萬古霉素治療耐甲氧西林金葡菌所致呼吸機相關性肺炎的比較分析[J];北方藥學;2012年08期

8 李宗平;崔丹萍;;利奈唑胺治療老年COPD并多重耐藥革蘭陽性球菌感染的療效分析[J];海峽藥學;2012年11期

9 鄧雪娥;利奈唑胺[J];中國新藥雜志;2001年11期

10 ;利奈唑胺全球研究出新結果[J];吉林醫(yī)學信息;2010年Z1期

相關會議論文 前10條

1 白艷;王羽凝;李其;王天琳;孫艷;王瑾;王睿;;利奈唑胺不良反應的文獻計量分析[A];中國藥學會藥物臨床評價研究專業(yè)委員會2015年學術年會會刊[C];2015年

2 毛小紅;方潔;;利奈唑胺致血小板減少的危險因素分析[A];中華醫(yī)學會臨床藥學分會2014年全國學術會議論文匯編[C];2014年

3 葛鳳;高燕;滕s

本文編號：2686234