【摘要】：帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)是一種以黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性退化為特征的神經(jīng)退行性疾病。PD治療的關(guān)鍵是遞送有效量的藥物入腦發(fā)揮作用,補(bǔ)充腦內(nèi)缺失的多巴胺仍是目前最有效的治療方法。當(dāng)前遞送藥物入腦存在兩方面問(wèn)題:一是藥物遞送量少,血腦屏障(Blood Brain Barrier,BBB)的存在阻止大多數(shù)藥物入腦發(fā)揮作用,其僅允許小的親脂性藥物跨越;二是藥物入腦后分布范圍廣,腦內(nèi)藥物分布無(wú)選擇性。本課題旨在設(shè)計(jì)一種多巴胺經(jīng)鼻腦靶向遞藥系統(tǒng),利用冰片的促滲作用促進(jìn)藥物經(jīng)鼻腔遞送入腦,以乳鐵蛋白為靶向分子修飾納米粒(Nanoparticles,NPs)使其入腦后濃集于PD病變部位實(shí)現(xiàn)靶向性,從而實(shí)現(xiàn)PD的有效治療,降低毒副作用:將冰片和多巴胺共包載于聚乙二醇-羥基乙酸共聚物(Methoxy Poly(ethylene glycol)-b-poly(lactide-co-glycolide),MPEG-PLGA)為載體的納米粒中,用乳鐵蛋白(Lactoferrin,Lf)作為靶向分子修飾納米粒實(shí)現(xiàn)主動(dòng)靶向,并進(jìn)行體外和體內(nèi)評(píng)價(jià),為該納米遞藥系統(tǒng)在PD治療中的開發(fā)提供依據(jù)。本課題的主要研究?jī)?nèi)容如下:1.納米粒的制備與表征通過(guò)乳化溶劑揮發(fā)法制備共包載冰片和多巴胺納米粒(Borneol and Dopamine Co-loaded Nanoparticles,DA BNPs),采用單因素考察法優(yōu)化處方和工藝,確定最優(yōu)處方工藝如下:多巴胺理論載藥量為30%,冰片理論載藥量為4%,聚合物濃度為20 mg/mL,油相為二氯甲烷,外水相為1%PVA水溶液,超聲功率為300 W。然后將巰基化的Lf與納米粒表面的馬來(lái)酰亞胺基連接得到Lf修飾的共包載冰片和多巴胺納米粒(DA Lf-BNPs)。通過(guò)最優(yōu)處方工藝制備的DA Lf-BNPs粒徑為(160.7±16.7)nm,多巴胺載藥量為(7.98±1.80)%,冰片載藥量為(1.78±0.22)%,Zeta電位為(-21.70±3.39)mV。體外釋放結(jié)果表明將多巴胺包載在納米粒中在PBS(pH 7.4)的釋放介質(zhì)中具有良好的緩釋特性。2.納米粒的細(xì)胞毒性與細(xì)胞攝取評(píng)價(jià)研究通過(guò)考察納米粒對(duì)人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)和支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)的毒性和攝取行為,評(píng)價(jià)所構(gòu)建遞藥系統(tǒng)對(duì)腦組織和鼻粘膜的毒性和遞藥特性。采用MTT法考察空白納米粒和包載多巴胺納米粒的細(xì)胞毒性,研究結(jié)果說(shuō)明空白納米粒具有較好的安全性和生物相容性,將多巴胺包載于納米粒后細(xì)胞毒性顯著低于游離多巴胺組。將熒光探針尼羅紅或香豆素-6包載于納米粒中,通過(guò)倒置熒光顯微鏡定性觀察尼羅紅納米粒的攝取行為,流式細(xì)胞儀定量考察香豆素-6納米粒的攝取,研究結(jié)果說(shuō)明對(duì)于SH-SY5Y細(xì)胞,Lf修飾納米粒能顯著增強(qiáng)攝取,具有更好的腦靶向性;對(duì)于16HBE細(xì)胞,共包載冰片和Lf修飾能夠協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞攝取。3.納米粒的腦靶向性評(píng)價(jià)采用活體動(dòng)物成像技術(shù),將熒光探針DiR碘化物包載于納米粒中經(jīng)鼻給藥后定性評(píng)價(jià)納米粒的腦靶向性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Lf-BNPs組的熒光強(qiáng)度更強(qiáng),說(shuō)明共包載冰片和Lf修飾能協(xié)同促進(jìn)藥物經(jīng)鼻遞送入腦,實(shí)現(xiàn)更好的腦靶向性。而且,經(jīng)鼻給藥后藥物主要濃集在腦組織,在其它器官分布很少,進(jìn)一步說(shuō)明經(jīng)鼻給藥和傳統(tǒng)給藥方式(口服給藥和靜脈給藥等)相比能夠顯著降低藥物毒性。4.納米粒的藥代動(dòng)力學(xué)研究本研究考察納米粒大鼠經(jīng)鼻給藥后在血及腦內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)行為。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,納米粒經(jīng)鼻遞送后,血中的藥代動(dòng)力學(xué)行為相似,這說(shuō)明Lf修飾和共包載冰片對(duì)于納米粒經(jīng)鼻遞送后進(jìn)入血液的行為沒(méi)有顯著影響。而腦組織中Lf-BNPs組的AUC_(0-12h)值為(1696.4±119.3)ng·h/g,與Lf-NPs組((1341.8±109.8)ng·h/g)和NPs組((830.6±108.9)ng·h/g)相比具有顯著性差異(p0.05),研究證明結(jié)果Lf修飾和共包載冰片能夠顯著增加納米粒遞送入腦的量,并實(shí)現(xiàn)靶向性。5.納米粒的藥效學(xué)評(píng)價(jià)為了評(píng)價(jià)構(gòu)建的遞藥系統(tǒng)對(duì)PD的治療作用,通過(guò)大鼠單側(cè)紋狀體注射6-OHDA誘導(dǎo)其多巴胺能神經(jīng)元損傷制備PD模型,以PD大鼠對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)行為及腦內(nèi)多巴胺和其代謝物含量評(píng)價(jià)納米粒的藥效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明Lf-BNPs組PD大鼠經(jīng)鼻給藥20天后,其對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)圈數(shù)較Lf-NPs組相比顯著降低(p0.05),損傷側(cè)紋狀體多巴胺和二羥基苯乙酸水平較PBS組相比有非常顯著的增加(p0.01)。這證明構(gòu)建的遞藥系統(tǒng)經(jīng)鼻給藥后實(shí)現(xiàn)了更好的PD治療效果。
【學(xué)位授予單位】：煙臺(tái)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R943

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