【摘要】：大腸屬于消化系統(tǒng)的下段,它在人體消化系統(tǒng)是一個重要的組成部分,對于維持人體內正常的內環(huán)境穩(wěn)定有重要作用。在人體中,大腸的作用是能夠進一步吸收糞便中的水分和電解質等。大腸的炎癥或損傷會影響人體健康,目前經常出現(xiàn)的腸炎類型有結腸炎和直腸炎,這些疾病都對人體造成危害。MiR-149-3p是一種小分子RNA,它的主要作用是和目標靶mRNA中的3' UTR或5' UTR結合,從而調節(jié)蛋白質翻譯以及mRNA的降解等作用。目前對于mRNA的研究越來越深入,更多的研究側重于microRNA與細胞信號通路結合,本實驗中主要研究的是NF-κB信號通路。NF-κB信號通路是一種經典的信號通路,已經有許多研究發(fā)現(xiàn)NF-κB信號通路與多種炎癥和癌癥有密切的關系。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn),miR-149-3p對腸炎的抑制作用與NF-κB信號通路密切相關。本實驗中,我們主要通過動物實驗和細胞實驗兩大部分對miR-149-3p在腸炎中的作用進行研究。在動物實驗中,我們主要采用小鼠進行實驗,用DSS誘導小鼠產生腸炎,構建出了小鼠腸炎模型,并取出其大腸組織,采用實時定量PCR的方法檢測小鼠組織中炎癥因子的表達情況,實驗結果發(fā)現(xiàn),實驗組小鼠與對照組相比,炎癥因子IL-2,IL-8,TNF-α,MCP-1的表達量均明顯上升,進行HE染色后發(fā)現(xiàn),miR-149-3p-/-小鼠比WT野生型小鼠對DSS誘導的大腸炎癥損傷更加嚴重,更加敏感。此外我們測量了小鼠的表型特征,處理組中miR-149-3p-/-小鼠的大腸長度明顯短于WT野生型小鼠,miR-149-3p-/-DSS組小鼠的體重下降比例明顯高于野生型DSS組小鼠,也就是說miR-149-3p-/-小鼠對DSS誘導的腸炎更加敏感。在細胞實驗中,我們采用人腸癌細胞caco2進行實驗研究,實時定量PCR檢測細胞中炎癥因子的表達,轉入miR-149-3p的處理組能夠抑制COX-2、iNOS、MCP-1、IP-10、IL-1α和TNF-α的表達,加入TNF-α誘導后,這些基因的表達水平顯著降低。Western Blot實驗研究發(fā)現(xiàn),miR-149-3p可以抑制IκBα蛋白的磷酸化。熒光素酶報告基因實驗表明,轉入miR-149-3p核酸模擬物后,能夠抑制NF-κB報告質粒的活性。綜上可以得出結論,miR-149-3p可以通過抑制NF-κB信號通路抑制腸炎。
【圖文】：

圖３－１實時定量ＰＣＲ逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ逡逑注：圖３－２中，ＷＴ為野生型小鼠，ＫＯ為ｍｉＲ－ＭＭｐＶ？小鼠。逡逑ＷＴ野生型小鼠實驗對照組與ＤＳＳ實驗處理組比較，ｍｉＲ－１４９－３ｐ－／－小鼠實驗逡逑對照組與ＤＳＳ實驗處理組比較，ＩＬ－２，邋ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ｃｔ，邋ＭＣＰ－１均明顯上升，ＷＴ逡逑野生型小鼠的炎癥因子表達上升量沒有ｍｉＲ－ＭＷｐＶ？小鼠顯著，說明ｍｉＲ－１４９－３ｐ逡逑可以抑制ＮＦ－ｋＢ下游基因的表達。ＷＴ野生型小鼠與ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ？小鼠相比，逡逑ｍｉＲ－Ｍｇｊｐ－７？小鼠的ＩＬ－２，ＩＬ－８，邋ＴＮＦ－ａ，ＭＣＰ－１這四種炎癥因子的表達量均上逡逑升，同樣地，再比較ＷＴ野生型小鼠ＤＳＳ處理組與ｍｉＲ－ＭＷｐ—？小鼠ＤＳＳ處理逡逑組，ｍｉＲ－１４９－３ｐｖ＿小鼠ＤＳＳ處理組的基因表達水平顯著升高，由此可說明ｍｉＲ－逡逑１４９－３ｐ對小鼠腸炎具有抑制作用

圖３－２小鼠體重稱量逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｗｅｉｇｈｔ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ逡逑注：圖３－２中，ＷＴ為野生型小鼠，ＫＯ為ｍｉＲ－ＭＷｐ－ｚ？小鼠。逡逑取出小鼠模型的大腸組織，并測量大腸的長度，我們發(fā)現(xiàn)ＤＳＳ實驗處理組逡逑的大腸長度比實驗對照組短，在實驗處理組中，，ｎｉｉＲ－Ｍ＋ＳｐＶ？小鼠的大腸長度明逡逑顯短于ＷＴ野生型小鼠。如圖３－３。逡逑１．４邋－Ｉ逡逑ｌｌ．２邋－逡逑Ｉ：邐｜邐Ｉ逡逑ＩＩ邐Ｉ邐Ｉ邐Ｉ逡逑ＷＴ邐＋邐＋邐－邐－逡逑Ｋ０邐＋邐＋逡逑ＤＳＳ邐－邐＋邐－邐＋逡逑圖３－３小鼠大腸長度測量逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ｃｏｌｏｎ邋ｌｅｎｇｔｈ邋ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ逡逑３３逡逑
【學位授予單位】：北京化工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R965

【參考文獻】

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1 丁醫(yī)峰;袁瓊瓊;侯一民;干安建;;細菌性腸炎的病原菌分布及藥敏分析[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2015年08期

2 朱云;張南征;江興松;馬文青;;成人真菌性腸炎的臨床特點及療效分析[J];徐州醫(yī)學院學報;2006年05期

本文編號：2665828