【摘要】：前列腺癌是指發(fā)生在前列腺上皮的惡性腫瘤,是男性中的第二大癌癥,并且是全世界男性癌癥死亡的主要原因之一。黑色素瘤是一種源自黑色素細(xì)胞,并且是皮膚癌中最惡性的腫瘤,易發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。目前,臨床上最有效的治療手段主要仍為手術(shù)治療、放療和化療等,化療是目前治療癌癥最有效的手段之一,但其治療效果不容樂觀,主要原因是化療藥物多為廣譜性,具有靶向性差,毒副作用大,體內(nèi)循環(huán)時間短等缺點,進(jìn)而使其臨床應(yīng)用受到了限制。實驗?zāi)康?根據(jù)Sigma受體在前列腺癌和黑色素瘤細(xì)胞表面高表達(dá),并能夠與其特異性配體茴香酰胺(AA)相結(jié)合的特性,通過對能夠發(fā)生靜電相互作用進(jìn)而裝載化療藥物的長循環(huán)靶向金納米遞送系統(tǒng)制備方法的探索與優(yōu)化,制備出一種能夠裝載表阿霉素的長循環(huán)靶向納米制劑,建立相應(yīng)化療藥物的含量檢測方法,并對最終劑型進(jìn)行表征,以及體外抗腫瘤作用的相關(guān)研究。實驗方法:(1)建立表阿霉素的含量檢測方法,使用紫外分光光度法或高效液相色譜法檢測金納米制劑中表阿霉素的含量,包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。(2)對裝載表阿霉素的金納米制劑的制備方法進(jìn)行了探索和優(yōu)化,包括不同的藥質(zhì)比,孵育時間和孵育溫度等,并最終根據(jù)其表征及穩(wěn)定性等確定最佳的制備方法和條件,得到成熟的劑型。(3)對兩種裝載表阿霉素的金納米制劑Au NP-PEG5000.EPI和Au NP-PEG5000-AA.EPI進(jìn)行制備和表征,包括粒徑大小、PDI及Zeta電位,采用離心的方法檢測表阿霉素的包封率,并對其在4℃0.01 M PBS(制劑制備環(huán)境)和37℃含50%FBS的生理鹽水(模擬人生理環(huán)境)中的穩(wěn)定性進(jìn)行考察;考察裝載表阿霉素的金納米制劑在37℃條件下p H敏感的體外藥物釋放情況。(4)考察金納米制劑的體外抗腫瘤作用,應(yīng)用MTT的方法,考察靶向與非靶向金納米制劑及其對照組對前列腺癌細(xì)胞PC-3和黑色素瘤細(xì)胞B16的細(xì)胞毒性作用;應(yīng)用熒光顯微鏡考察靶向與非靶向金納米顆粒在PC-3和B16細(xì)胞中的細(xì)胞攝取情況;采用流式細(xì)胞術(shù)研究靶向與非靶向金納米制劑對PC-3和B16細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡情況,并采用Western Blot對相關(guān)凋亡調(diào)控因子Caspase 3,Bcl-2以及Bax的表達(dá)情況進(jìn)行考察,確定相關(guān)凋亡機(jī)制;應(yīng)用共聚焦顯微鏡考察靶向與非靶向金納米制劑在PC-3和B16細(xì)胞中的內(nèi)體逃逸情況。實驗結(jié)果:(1)繪制了表阿霉素含量標(biāo)準(zhǔn)曲線,在測定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。(2)通過對金納米制劑制備方法的探索和優(yōu)化,確定最終藥質(zhì)比EPI:Au NPs(w:w)=1:5,孵育溫度為45℃,孵育時間為12 h,此時EPI包封率最高,可達(dá)到80%左右。(3)對靶向與非靶向金納米制劑進(jìn)行表征,粒徑大小均在130-160nm之間,PDI在0.22左右,分布均勻,由于表阿霉素帶正電,故裝載表阿霉素后,其Zeta電位也發(fā)生了相應(yīng)變化,并測得對表阿霉素的包封率可達(dá)到80%左右,且在4℃0.01 M PBS和37℃含50%FBS的生理鹽水中穩(wěn)定性良好;體外釋放結(jié)果顯示,金納米制劑具有p H敏感的藥物釋放行為,對表阿霉素的緩釋作用顯著,且在p H 5.5(模擬腫瘤細(xì)胞內(nèi)體環(huán)境p H)條件下釋放率更高。(4)MTT結(jié)果顯示,靶向的金納米制劑對PC-3和B16細(xì)胞均表現(xiàn)出顯著的殺傷作用;熒光顯微鏡下可以觀察到,靶向的金納米制劑在PC-3和B16細(xì)胞中均有更高的攝取;流式結(jié)果顯示,靶向的金納米制劑能夠在PC-3和B16細(xì)胞中更顯著地誘導(dǎo)其凋亡,并且相關(guān)凋亡調(diào)控因子Caspase 3各組間表達(dá)量無顯著性差異,而針對Cleaved caspase 3和促凋亡因子Bax,靶向金納米制劑組均觀察到更高的表達(dá),且對于抑制凋亡因子Bcl-2,觀察到靶向金納米組表達(dá)最低;共聚焦顯微鏡的結(jié)果可以看出,靶向金納米制劑組有更多的表阿霉素從細(xì)胞內(nèi)體中逃出,避免其在內(nèi)體的酸性環(huán)境中質(zhì)子化后被隔離,使藥物能夠最大限度的發(fā)揮作用。本課題制備了一種能夠有效裝載表阿霉素的長循環(huán)金納米靶向遞送系統(tǒng),能夠大大降低表阿霉素對機(jī)體其他正常組織和器官的毒副作用。靶向作用能使得藥物在腫瘤區(qū)域富集,提高藥物對腫瘤的殺傷作用。因此,本研究也為靶向遞送表阿霉素的臨床應(yīng)用提供了有力的實踐依據(jù)。
【圖文】：

前列腺癌是指發(fā)生在前列腺上皮的惡性腫瘤，是男性中的第二大癌癥，并且是全世界男性癌癥死亡的主要原因之一。黑色素瘤是一種源自黑色素細(xì)胞，并且是皮膚癌中最惡性的腫瘤，易發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。目前，臨床上最有效的治療手段主要仍為手術(shù)治療、放療和化療等，化療是目前治療癌癥最有效的手段之一，但其治療效果不容樂觀，主要原因是化療藥物多為廣譜性，具有靶向性差，毒副作用大，體內(nèi)循環(huán)時間短等缺點，進(jìn)而使其臨床應(yīng)用受到了限制。實驗?zāi)康模焊鶕?jù) Sigma 受體在前列腺癌和黑色素瘤細(xì)胞表面高表達(dá)，并能夠與其特異性配體茴香酰胺（AA）相結(jié)合的特性，通過對能夠發(fā)生靜電相互作用進(jìn)而裝載化療藥物的長循環(huán)靶向金納米遞送系統(tǒng)制備方法的探索與優(yōu)化，制備出一種能夠裝載表阿霉素的長循環(huán)靶向納米制劑，建立相應(yīng)化療藥物的含量檢測方法，并對最終劑型進(jìn)行表征，以及體外抗腫瘤作用的相關(guān)研究。

開了臨床的應(yīng)用前景，也提高了患者的生存質(zhì)量概述EPI）又稱表柔比星，是阿霉素（DOX）的同分抗腫瘤化療藥，對細(xì)胞周期有非特異性，對多種有蒽環(huán)，屬蒽環(huán)類藥物，因此，其臨床應(yīng)用往往。EPI 的作用機(jī)制為可直接作用于腫瘤細(xì)胞的 D，干擾細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過程，進(jìn)而影響 mRNA 的生。此外，EPI 對拓樸異構(gòu)酶Ⅱ也有抑制作用，與效，且對心臟的毒性相對較小。盡管近年來以 E于晚期癌癥治療，然而，，EPI 的非靶向性仍會引存質(zhì)量下降，很多患者常常因為無法耐受而被迫
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96

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本文編號：2662545