【摘要】：目的刺激響應(yīng)性的藥物載體由于具有較高藥物的生物利用率、可以降低藥物對正常細(xì)胞的毒副作用、可以藥物在病理部位實現(xiàn)靶向遞送、具有良好的生物相容性等,已經(jīng)在生物醫(yī)學(xué),藥物輸送、疾病診斷與治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。病理部位微環(huán)境與正常環(huán)境之間的差異性使這些藥物載體可以用于設(shè)計藥物的遞送系統(tǒng),通常利用較低的pH和高濃度的谷胱甘肽或胰蛋白酶來刺激藥物載體,通過斷裂相應(yīng)的化學(xué)鍵或分解載體使具有刺激響應(yīng)性的藥物載體在病理部位因內(nèi)部刺激促使藥物釋放并在健康組織環(huán)境中避免藥物對正常細(xì)胞的毒副作用。藥物的遞送系統(tǒng)可以改善所載藥物的治療效果和安全性;延長藥物在病理部位的作用時間;藥物優(yōu)先在病理部位富集;克服藥物非特異性靶向的缺陷。本文采用具有良好的生物相容性和生物可降解性的原料—碳酸鈣、牛血清蛋白和茶多酚,使用原位封裝法,制備出加載依達(dá)拉奉的碳酸鈣復(fù)合微球和加載阿霉素的復(fù)合納米球,復(fù)合顆粒因具有內(nèi)部因子刺激性響應(yīng)特性,可以用作藥物的刺激性響應(yīng)遞送系統(tǒng)。方法用蛋清(Egg White)作為調(diào)控劑,制備裝載依達(dá)拉奉(Edaravone)的碳酸鈣復(fù)合微球(Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球)。牛血清白蛋白(BSA)和綠茶多酚(TP)自組裝制備加載多柔比星(DOX)的復(fù)合納米球,并用葉酸(FA)進(jìn)一步修飾這些納米載體,簡稱為DOX@BSA-TP-FA納米球。通過掃描電子顯微鏡(SEM)和透射電子顯微鏡(TEM)對復(fù)合顆粒進(jìn)行形態(tài)的表征。采用KBr壓片法,用傅立葉變換紅外光譜鑒定復(fù)合顆粒的組成。采用激光共聚焦掃描顯微鏡(CLSM)研究復(fù)合顆粒在不同條件下對細(xì)胞的影響。在微環(huán)境刺激因子存在條件下,通過藥物體外釋放和MTT實驗研究復(fù)合顆粒的智能響應(yīng)特性和釋藥行為。結(jié)果(1)制備的Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球具有較好的形貌,表面粗糙,其是由許多小顆粒組成的聚集體,直徑范圍為7~10μm,有較好的單分散性;制備的DOX@BSA-TP-FA納米球尺寸均一,平均直徑為220 nm,具有良好的分散性。(2)Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球的載藥效率(DLE)和載藥量(DLC)分別為89.4%和19.2%;DOX@BSA-TP-FA納米球的DLE和DLC為86.4%和23.5%。(3)由傅里葉紅外光譜圖、TG分析和高效液相吸收光譜可知,依達(dá)拉奉已成功被包封進(jìn)所制備的復(fù)合微球中;由傅里葉紅外光譜圖和紫外吸收光譜可知,DOX已成功被包封進(jìn)所制備的納米球中。(4)依達(dá)拉奉體外釋放實驗中,Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球,在pH=7.4時,透析9 h后,依達(dá)拉奉的釋放量為5.4%;pH=5.0時,依達(dá)拉奉的釋放量在6 h內(nèi)增加至94.4%。(5)阿霉素體外釋放實驗中,DOX@BSA-TP-FA納米球,在pH=7.4時,0.01 mmol GSH中透析16 h后,DOX的累積釋放僅為12.7%;pH=7.4時,10mmol GSH中透析16 h后,DOX釋放率接近61.4%;pH=7.4時,10 mmol GSH+0.04 mmol胰蛋白酶緩沖溶液中透析16 h,DOX的累積釋放量增加至85.5%。(6)MTT實驗顯示Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球在pH=5.0,H_2O_2(800μmol/L)的刺激下,可以的顯著地促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。(7)MTT實驗結(jié)果顯示DOX@BSA-TP-FA納米球顯示出比游離DOX更高的細(xì)胞毒性,且DOX@BSA-TP-FA納米球?qū)φ＜?xì)胞具有低細(xì)胞毒性,并且它可以減少由DOX引起的細(xì)胞損傷。結(jié)論(1)用蛋白質(zhì)為調(diào)控劑制備具有pH敏感特征的CaCO_3載依達(dá)拉奉礦化微球,并用于微創(chuàng)骨髓炎的潛在治療。所制備的Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球可以在較低pH值的H_2O_2刺激下保護(hù)和促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。pH=7.4時,Eda@CaCO_3-EW復(fù)合微球較穩(wěn)定,只釋放出少量的依達(dá)拉奉;pH=5.0時,可逐漸降解,復(fù)合微球的CaCO_3部分用于中和酸性環(huán)境。同時,包封在CaCO_3微球中的依達(dá)拉奉被釋放以抵抗氧化應(yīng)激。(2)基于BSA和TP自組裝成納米球用于加載DOX,并用FA進(jìn)一步修飾后得到復(fù)合納米球(DOX@BSA-TP-FA納米球)。DOX@BSA-TP-FA納米球在0.01 mmol GSH中較穩(wěn)定;在10 mmol GSH中DOX釋放率接近61.4%;在10mmol GSH+0.04 mmol胰蛋白酶中DOX的累積釋放量增加的更多。且DOX@BSA-TP-FA納米球?qū)δ[瘤細(xì)胞具有較高的細(xì)胞毒性,還可以減少由DOX誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷。
【圖文】：

CaCO3-EW 復(fù)合微球的 SEM（a，b）和 TEM（a@CaCO3-EW 復(fù)合微球的 SEM 和 TEM 圖像。圖，，產(chǎn)品直徑范圍為 7~10 μm。圖 1b 顯示了復(fù)合微合微球由許多納米小球組成。TEM 圖像（圖 1cEW 復(fù)合微球的實心結(jié)構(gòu)。圖 1d 是圖 1c 的局部放面，進(jìn)一步驗證了其由許多小顆粒組成的聚集體。@CaCO3-EW 復(fù)合微球的紅外和 XRD 分析

CaCO3-EW 復(fù)合微球的 SEM（a，b）和 TEM（a@CaCO3-EW 復(fù)合微球的 SEM 和 TEM 圖像。圖，產(chǎn)品直徑范圍為 7~10 μm。圖 1b 顯示了復(fù)合微合微球由許多納米小球組成。TEM 圖像（圖 1cEW 復(fù)合微球的實心結(jié)構(gòu)。圖 1d 是圖 1c 的局部放面，進(jìn)一步驗證了其由許多小顆粒組成的聚集體。@CaCO3-EW 復(fù)合微球的紅外和 XRD 分析
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 高潔;李博華;;靶向抗腫瘤納米藥物研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2008年02期

本文編號：2640114