【摘要】：益生菌具有良好的功能特性,有益于人類(lèi)免疫和健康。一般規(guī)定益生菌產(chǎn)品菌數(shù)量超過(guò)10~6(CFU/g)能達(dá)到較好的效果。但是,益生菌要經(jīng)歷胃液及腸液的破壞作用,加上儲(chǔ)存過(guò)程中環(huán)境因素的破壞,導(dǎo)致益生菌活性大大降低。因此,必須采取手段提高益生菌活性。本研究采用微膠囊擠出法與真空冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合的方法,對(duì)一株由本實(shí)驗(yàn)室保存的鼠李糖乳桿菌進(jìn)行包埋,優(yōu)化了工藝條件,進(jìn)行了性能研究,最后研究了微膠囊對(duì)小鼠腸道菌群的影響。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:(1)通過(guò)體外評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn),對(duì)鼠李糖乳桿菌L427的腸道特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明菌株增殖迅速,2 h即進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。對(duì)pH 2.0的酸度幾乎不耐受;對(duì)0.3%膽鹽濃度能勉強(qiáng)耐受,經(jīng)胃腸液處理后菌活性大大降低,需要對(duì)該菌株進(jìn)行保護(hù)提高菌活性。(2)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),研究了菌液-壁材體積比、海藻酸鈉濃度、刺云實(shí)膠濃度以及氯化鈣濃度對(duì)鼠李糖乳桿菌腸溶性微膠囊形成的影響,并進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),確定了擠出法制備微膠囊最佳包埋工藝條件為海藻酸鈉濃度2%,刺云實(shí)膠濃度0.5%,氯化鈣濃度0.3 mol/L,菌液-壁材體積比1:6;在此條件下制備的微膠囊的活菌數(shù)和包埋產(chǎn)率分別為4×10~8CFU/g和94.51%。微膠囊經(jīng)模擬胃液和模擬腸液處理后,結(jié)果表明制備的微膠囊具有良好的胃液耐受性和腸道釋放性。(3)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),研究了保護(hù)劑對(duì)鼠李糖乳桿菌微膠囊冷凍干燥的影響。選取甘露醇和海藻糖進(jìn)行正交試驗(yàn),確定復(fù)合保護(hù)劑的最佳配方:甘露醇濃度3.5%,海藻糖濃度4%,在此條件下制備的凍干微膠囊中菌株的最大存活率為82.92%。凍干微膠囊經(jīng)模擬胃液和模擬腸液處理后,結(jié)果表明凍干微膠囊具有良好的胃液耐受性和腸溶性,且保護(hù)劑的添加能提高胃液耐受性和腸溶性。含水量實(shí)驗(yàn)和保質(zhì)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,鼠李糖乳桿菌凍干微膠囊在儲(chǔ)存期間能維持較好的活性。(4)將小鼠分為對(duì)照組、空膠囊組、鼠李糖乳桿菌菌液組以及鼠李糖乳桿菌微膠囊組分別飼喂16天,然后恢復(fù)正常飲食繼續(xù)飼喂8天。每隔4天取一次糞便,通過(guò)高通量測(cè)序法分析幾組處理對(duì)小鼠腸道菌群的影響。結(jié)果表明鼠李糖乳桿菌菌液或者微囊化鼠李糖乳桿菌能提高小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的豐富度與多樣性;調(diào)節(jié)腸道主要菌種分布,在門(mén)水平上,使變形桿菌門(mén)減少,擬桿菌門(mén)增多、厚壁菌減少,在科水平上使一些致病菌減少,如黃單胞菌科和巴斯德菌科等;因此分析鼠李糖乳桿菌通過(guò)使致病菌數(shù)量減少,來(lái)達(dá)到益生效果。
【圖文】：

圖 1-1 鼠李糖乳桿菌 L427 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定圖 1-1 可知，在菌株生長(zhǎng)中幾乎沒(méi)有觀察到滯后期，并且在培養(yǎng) 2 小期，表明菌株生長(zhǎng)迅速。在 2-6 h 期間，菌株生長(zhǎng)速度幾乎呈直線菌株生長(zhǎng)速度降低，但是，它仍然以一定的速率生長(zhǎng)，表明菌株在 期。12 h 后 OD600 nm略微下降，但不明顯，表明菌株進(jìn)入穩(wěn)定期。益，，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中后期和穩(wěn)定期的菌液是其最佳選擇[61]。由結(jié)果可見(jiàn)液的最佳時(shí)間段可選在 9-14 h，該時(shí)間段處于對(duì)數(shù)期后期和穩(wěn)定期前要求且菌株仍有一定生長(zhǎng)活性且生長(zhǎng)相對(duì)穩(wěn)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定過(guò)進(jìn)一步繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立 OD600 nm與活菌數(shù)間的線性關(guān)系（如益生菌劑時(shí)能更方便快速地計(jì)算活菌數(shù)。圖1-2可知，得到線性回歸方程y=0.6885x+8.5786，R2=0.9997（x為O的對(duì)數(shù)）。線性系數(shù)r非常接近1，表明標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性關(guān)系

株對(duì) pH 2.0 的酸度幾乎不耐受；在 pH 3.0 的 MRS 培養(yǎng)基中有菌體生長(zhǎng)，表明該菌株對(duì)pH 3.0 的酸度能部分耐受；在 pH 4.0 的 MRS 培養(yǎng)基中，鼠李糖乳桿菌菌株 L427 能較圖1-3 鼠李糖乳桿菌L427在不同pH條件下的生長(zhǎng)狀況
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R96;TS201.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2610747