本文關鍵詞：一種新型肽對Lewis肺腫瘤細胞抑制作用的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺癌作為惡性腫瘤之一,已對人類的健康構成了嚴重的威脅。近年來,由于快速發(fā)展的工業(yè)化建設而導致的環(huán)境污染的加重、越來越多的人們吸煙等因素,使我國的肺癌發(fā)病率呈逐年遞增的趨勢,并且其致死率已位于我國腫瘤致死率之首。肺癌在患者發(fā)病早期時不易被察覺,去臨床就診時,病情往往已發(fā)展到中晚期,與最佳的治療時機失之交臂。目前臨床上的治療手段仍以傳統(tǒng)治療方法為主,如手術、放療和化療,這些傳統(tǒng)治療方法雖然能使臨床療效提高,延長了患者的生存期,但是它們的毒副作用很大,這也是這些治療方法面臨的嚴峻問題。迄今為止,國內外研制的抗腫瘤藥物眾多,但是多數(shù)藥物有不良反應多、耐藥性以及價格昂貴等特點。為此,尋找高效、低毒、價廉,且能有效提高療效的藥物治療肺腫瘤仍是臨床亟需解決的問題。近年來研究表明,多肽類藥物具有抗腫瘤的功效,與其它藥物相比,多肽類藥物由于具有分子量小、與其他物質結合而成的化合物穩(wěn)定性高、不易被蛋白酶水解以及制作成本低等優(yōu)點,其在治療腫瘤方面已有著比較明顯的優(yōu)勢。目的:研究新型肽對Lewis肺腫瘤細胞增殖、侵襲和凋亡作用的影響。方法:采用MTT法觀察不同時間點(24h48h及72h)新型肽對Lewis肺腫瘤細胞的增殖抑制作用;Transwell小室法檢測細胞侵襲能力;采用吖啶橙/溴化乙錠法、線粒體膜電位法檢測Lewis肺腫瘤細胞在48h細胞凋亡情況,熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡的情況及細胞線粒體膜電位的變化;流式細胞儀檢測新型肽對Lewis肺腫瘤細胞的細胞周期細胞凋亡的影響;用Western Blot法檢測Cyclin-D1、Pro-caspase3蛋白表達水平。結果:研究顯示,新型肽對Lewis細胞在不同時間點具有一定抑制增殖的作用,并在48h作用最為明顯;在Transwell侵襲小室實驗中,穿膜細胞數(shù)呈下降趨勢,表明細胞侵襲能力減弱;用熒光顯微鏡觀察細胞凋亡情況,治療組細胞的線粒體膜電位顯著降低,表明細胞發(fā)生凋亡;用流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡情況,G0/G1期細胞數(shù)顯著增加,S期細胞數(shù)減少,晚期細胞凋亡率明顯增加;Western Blot檢測結果表明,隨著新型肽濃度的增加,Cyclin-D1蛋白、Pro-caspase3蛋白的表達水平均逐漸降低。結論:新型肽能明顯抑制Lewis肺腫瘤細胞的增殖和侵襲能力,阻礙細胞周期的進展,其作用機制可能與Cyclin-D1蛋白、Pro-caspase3蛋白表達降低有關,引起細胞凋亡。
【關鍵詞】：新型肽 Lewis肺腫瘤細胞 細胞凋亡 蛋白表達
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮寫詞表9-14
• 第1章 緒論14-21
• 1.1 肺癌14-15
• 1.1.1 小細胞肺癌(SCLC)14-15
• 1.1.2 非小細胞肺癌（NSCLC）15
• 1.2 治療肺癌的手段15-17
• 1.2.1 手術治療16
• 1.2.2 放療與化療16-17
• 1.2.3 分子靶向治療17
• 1.2.4 生物治療17
• 1.3 多肽17-18
• 1.3.1 二肽化合物18
• 1.3.2 三肽化合物18
• 1.3.3 四肽化合物18
• 1.4 多肽的篩選18-19
• 1.5 多肽抗腫瘤的機制19-20
• 1.5.1 誘導細胞凋亡19
• 1.5.2 直接作用于腫瘤細胞膜19
• 1.5.3 抑制腫瘤新生血管生成19-20
• 1.6 多肽類藥物治療腫瘤的優(yōu)點20
• 1.7 本實驗設計路線20-21
• 第2章 材料和方法21-30
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 細胞、藥品21
• 2.1.2 實驗試劑、耗材21-22
• 2.1.3 主要儀器22
• 2.2 溶液的配置22-26
• 2.2.1 新型肽溶液的配置22
• 2.2.2 陽性對照藥博來霉素溶液的配置22-23
• 2.2.3 主要試劑的配置23-26
• 2.3 方法26-29
• 2.3.1 MTT法檢測細胞增殖26
• 2.3.2 Transwell侵襲小室實驗26-27
• 2.3.3 AO/EB雙染細胞爬片27
• 2.3.4 JC-1 染色檢測線粒體膜電位27-28
• 2.3.5 流式細胞儀檢測細胞周期28
• 2.3.6 流式細胞儀檢測細胞凋亡—AnnexinV-FITC法28-29
• 2.3.7 Western Blot檢測Cyclin-D1、Pro-caspase3的表達29
• 2.4 統(tǒng)計學方法29-30
• 第3章 結果30-43
• 3.1 新型肽對Lewis腫瘤細胞增殖作用的影響30-32
• 3.2 新型肽對Lewis肺腫瘤細胞侵襲能力的影響32-34
• 3.3 AO/EB雙染法檢測細胞凋亡34-35
• 3.4 新型肽對Lewis腫瘤細胞線粒體膜電位的影響35-37
• 3.5 新型肽對Lewis腫瘤細胞周期分布的影響37-38
• 3.6 用Annexin V-FITC法檢測新型肽對Lewis腫瘤細胞凋亡作用的影響38-40
• 3.7 Western Blot檢測新型肽對Lewis腫瘤細胞Cyclin-D1、Pro-caspase3蛋白表達的影響40-43
• 第4章 討論43-48
• 第5章 結論48-49
• 參考文獻49-57
• 作者簡介及科研成果57-58
• 致謝58

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本文編號：260273