【摘要】：間尼索地平(m-nisoldipine)[化學名稱:1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸甲酯異丁酯]是由河北醫(yī)科大學藥學院首次合成的一類新型二氫吡啶類藥物,存在一個手性中心,可拆分為兩個不同的光學對映體(R,S-m-nisoldipine)。間尼索地平與尼索地平(nisoldipine)為同分異構體,藥理活性相當,但光穩(wěn)定性較優(yōu),主要用于高血壓和心臟病的防治。前期實驗表明,間尼索地平原型藥物排泄較少,主要以代謝物形式排出體外,并且目前主要研究其對映體在血液中代謝物情況,對于其在腸道菌群中代謝研究較少,故有必要對這方面展開實驗,為臨床研究提供依據(jù)。肝臟作為藥物代謝的重要器官,是多數(shù)代謝反應的發(fā)生場所,CYP450酶是參與藥物代謝反應的重要酶類,并容易被藥物誘導或抑制,了解藥物與CYP450酶的作用關系能夠為藥物作用機制研究提供理論依據(jù)。以往研究已證明外源性藥物對CYP450酶的誘導主要是經(jīng)核受體PXR介導的,間尼索地平在此方面的相關研究尚屬空白,因此有必要對其此方面進行研究。本試驗應用UPLC-Q-TOF-MS技術,采用大鼠腸道菌群液溫孵體系,對間尼索地平代謝途徑及其代謝產(chǎn)物結構進行分析,為進一步理解其作用機制提供依據(jù)和技術支持。采用RT-q PCR技術,以大鼠作為研究對象,系統(tǒng)分析了在不同劑量下,長期給予間尼索地平對CYP450酶五種亞型的影響。利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng),建立h PXR介導的CYP450酶的藥物誘導劑體外篩選體系,考察間尼索地平對映體對CYP450酶的誘導作用機制。本研究旨在預測間尼索地平與其它藥物相互作用,并指導臨床合理用藥。第一部分基于UPLC-Q-TOF-MS技術的大鼠腸道菌轉化間尼索地平對映體的體外代謝研究目的:建立腸道菌轉化研究間尼索地平對映異構體代謝產(chǎn)物的方法,確定代謝物的結構及轉化途徑。方法:將R,S-間尼索地平分別與大鼠腸道菌于體外厭氧溫孵培養(yǎng)2 h,用正己烷-乙醚(1:1)萃取,離心后取上清液氮氣吹干,復溶后進行UPLC-Q-TOF-MS分析。色譜條件:采用Poroshell 120 EC-C18色譜柱(2.1mm×100 mm,2.7μm)色譜柱,以0.05%甲酸水-乙腈為流動相,梯度洗脫,流速400μL·min-1,柱溫40℃;質譜條件:電噴霧離子源(ESI源),負離子模式檢測。比較樣品和相應的菌空白、藥物空白的數(shù)據(jù),檢測推斷其代謝產(chǎn)物結構。結果:在對映體溫孵液中檢測到原藥及其3種代謝產(chǎn)物:1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-氨基苯基)-3,5-吡啶二羧酸異丁基甲酯、1,4-二氫-6-甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸異丁基甲酯和1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸二甲酯,并推斷MNS的腸道菌轉化途徑。結論:間尼索地平在腸道菌從中發(fā)生生物轉化而形成代謝產(chǎn)物,對映體的代謝產(chǎn)物種類相同,代謝途徑主要為還原和氧化反應。第二部分基于RT-q PCR技術的間尼索地平對CYP450酶活性的影響目的:研究間尼索地平對大鼠CYP450酶CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1亞型的影響。方法:將SD大鼠隨機分為對照組,間尼索地平低、中、高劑量組(2.5,5.0,12.5 mg·kg-1)。各組大鼠每天灌胃給藥一次,連續(xù)灌胃15天后處死,并用RT-q PCR技術定量分析大鼠肝組織中CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1的m RNA表達水平。結果:與對照組比較,間尼索地平能下調CYP1A2,CYP2B,CYP2D m RNA的表達,可以上調CYP2C11,CYP3A1 m RNA的表達,并且呈顯劑量-效應關系,低和高劑量組m RNA的表達水平有顯著性差異。結論:間尼索地平對CYP450酶各亞型m RNA水平有調節(jié)作用,提示間尼索地平可能通過影響CYP450酶對其它藥物的代謝發(fā)揮作用。第三部分間尼索地平對映體對h PXR介導的CYP450酶的轉錄調節(jié)作用機制研究目的:建立h PXR介導的CYP450酶的藥物誘導劑體外篩選體系,考察R,S-間尼索地平對CYP450酶的誘導是否由h PXR介導。方法:利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng),將包含h PXR蛋白識別和結合調控元件的CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4啟動子序列插入報告基因上游,將表達載體和報告載體共轉染Hep G2細胞,分別用9.7、2.425和1.2125μg·m L-1的R,S-間尼索地平處理48 h后裂解細胞進行雙熒光素酶活性檢測。結果:R,S-間尼索地平實驗組與0.1%DMSO溶媒對照組存在差異(P0.05)。R-間尼索地平可以通過h PXR誘導CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4的表達。S-間尼索地平可以通過h PXR誘導CYP2B6和CYP2C9的表達,但是對CYP3A4沒有影響。結論:該研究成功構建h PXR介導的CYP450酶藥物誘導劑的體外篩選體系,R,S-間尼索地平通過激活h PXR介導了CYP450酶的表達上調,并表現(xiàn)出劑量-效應關系。
【圖文】：

圖 2 空白樣品Ⅰ（A）、空白樣品Ⅱ（B）、樣品（C）的總離子流圖Fig.2 Representative total ion chromatograms (TIC) of rat intestinal florasamples by UHPLC-Q-TOF/MS in (A) the blankⅠsample, (B) the blank Ⅱsample, (C) incubated sample

18圖 3 R,S-間尼索地平的主要裂解途徑Fig.3 The main proposed fragmentation pathways of R,S-m-nisoldipine
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 周盛會;湯浩;;中藥調節(jié)細胞色素P450酶活性的方法學研究概述[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2016年11期

2 陳鑫;韓霜;臧素綱;楊萍燦;汪曉鶯;周玉貴;;實時熒光定量PCR檢測血清miR-7方法的建立及臨床初步應用[J];中國實驗診斷學;2016年06期

3 聞志彬;張明理;;松葉豬毛菜干旱脅迫下實時定量PCR內參基因的篩選[J];植物生理學報;2015年11期

4 張云燕;徐王彥君;湯響林;馬增春;王宇光;梁乾德;譚洪玲;肖成榮;王振中;蕭偉;高月;;熱毒寧注射液對大鼠肝臟CYP450酶的影響[J];中國中藥雜志;2015年14期

5 黃銘珊;金霆;;探討實時熒光定量PCR法檢測血液新生隱球菌的臨床意義[J];實用檢驗醫(yī)師雜志;2015年01期

6 苑霖;賈佩佩;孫宇鵬;張曉旭;張智勇;張?zhí)m桐;;間尼索地平對映體在人肝微粒體中的酶促反應動力學研究[J];藥物分析雜志;2014年12期

7 韋忠紅;朱智杰;劉玉萍;劉兆國;盛曉波;汪思亮;陶麗;祝娉婷;陳文星;王愛云;陸茵;;TNF-α 3'-UTR雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的構建及丹參酮類藥物篩選[J];中國藥理學通報;2015年01期

8 李敏;綦國紅;;實時熒光定量PCR技術在食源性致病菌檢測中的應用[J];中國食物與營養(yǎng);2014年08期

9 汪永保;余慶;李映志;李洪波;葉春海;;菠蘿蜜實時熒光定量PCR分析中內參基因的篩選[J];熱帶作物學報;2014年07期

10 康志杰;崔嵩;李莉;高貝貝;黃丹;陳雪瑜;高源;楊巖;閆金松;;急性早幼粒細胞白血病PML/RARα融合基因篩查及實時定量檢測平臺的建立[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2014年07期

相關博士學位論文 前1條

1 孫宇鵬;基于細胞色素P450代謝酶的間尼索地平代謝轉化及藥物-藥物相互作用（DDI）研究[D];河北醫(yī)科大學;2016年

相關碩士學位論文 前8條

1 董洋洋;實時熒光PCR對牛肉中摻入鴨肉和豬肉的定量檢測研究[D];黑龍江八一農墾大學;2016年

2 常延超;L-型電壓依賴性鈣通道α_1亞單位在兔膝骨關節(jié)炎軟骨細胞基質代謝中的作用及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 胡東莉;硝苯地平對人孕烷X受體介導的CYP2B6和CYP2C9的轉錄調節(jié)作用的研究[D];中南大學;2013年

4 孔德志;間尼索地平質量控制與藥代動力學研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

5 景秀娟;間尼索地平的質量控制和體內外代謝研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

6 李敏;間尼索地平光學異構體的手性拆分與藥代動力學研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

7 陳丹;人血液循環(huán)DNA的定量檢測研究[D];南京醫(yī)科大學;2007年

8 王雪;（Rac）-間—尼索地平、（S）-間—尼索地平和（R）-間—尼索地平藥理效應的比較[D];河北醫(yī)科大學;2007年

，

本文編號：2565560