【摘要】：目的:本研究利用肝素前體K5多糖連接抗腫瘤藥物阿霉素(doxorubicin,DOX)制備具有p H敏感特性的K5多糖-阿霉素前體藥物(K5-DOX),并在體外對(duì)其理化性質(zhì)和活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法:通過(guò)希夫堿反應(yīng)制備K5-DOX,對(duì)DOX負(fù)載量、K5-DOX在溶液中的形貌和體外藥物釋放等性質(zhì)進(jìn)行了考察。通過(guò)人宮頸癌He La細(xì)胞對(duì)其體外細(xì)胞攝取和細(xì)胞毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:成功制備K5-DOX,DOX含量為17.4%。藥物釋放研究發(fā)現(xiàn),K5-DOX在p H 5.0酸性條件下DOX的釋放速率遠(yuǎn)高于生理p H 7.4時(shí)DOX的釋放速率,具有p H響應(yīng)性。納米粒子表面帶負(fù)電荷,在含10%胎牛血清(FBS)溶液中表現(xiàn)出可拮抗血清的優(yōu)良特性。細(xì)胞攝取結(jié)果表明,K5-DOX可迅速被細(xì)胞攝取,且其細(xì)胞攝取率遠(yuǎn)高于游離阿霉素。體外細(xì)胞毒性結(jié)果表明,K5-DOX具有良好的抗腫瘤活性。結(jié)論:結(jié)果表明,K5-DOX是一種具有潛在應(yīng)用價(jià)值的抗腫瘤前體藥物,K5多糖有望成為新一代藥物載體。
【圖文】：

胞接種至96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞密度7000個(gè)/孔在37℃，CO2(5%)飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。加入各受試藥物(溶于含10%FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基中)，繼續(xù)培養(yǎng)48h后每孔加入0．5mg·mL－1MTT溶液100μL，37℃培養(yǎng)4h，吸出上清液，用100μLDMSO溶解沉淀物，使用酶標(biāo)儀在570nm處檢測(cè)吸光度(A)。細(xì)胞存活率=(Asample/Acontrol)×100%。結(jié)果1K5-DOX的合成K5多糖先通過(guò)高碘酸氧化，使部分含鄰位羥基的葡萄糖酸環(huán)氧化開(kāi)環(huán)，得到醛基化K5多糖。之后利用醛基與DOX上的氨基反應(yīng)得到酸敏感的希夫堿(圖1)，制備得到K5-DOX。圖1K5-DOX的合成路線(xiàn)所得產(chǎn)物K5-DOX通過(guò)1HNMＲ譜進(jìn)行表征，如圖2所示。與K5多糖相比，K5-DOX中K5多糖的峰仍存在，在7．5～8．0ppm處出現(xiàn)DOX結(jié)構(gòu)中苯環(huán)上的H的峰，證明已成功制備得到K5-DOX。根據(jù)DOX標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到K5-DOX中DOX的含量為17.4%，相當(dāng)于約100個(gè)K5雙糖單位中連接14個(gè)DOX分子。K5-DOX水溶液于4℃冰箱中放置3個(gè)月后仍澄清，無(wú)沉淀產(chǎn)生，說(shuō)明K5-DOX具有良好的穩(wěn)定性。圖2K5多糖(D2O)與K5-DOX(DMSO-d6)的核磁共振氫譜2K5-DOX納米粒子的制備及表征由于K5多糖具有良好的水溶性，而連接至K5多糖的DOX分子結(jié)構(gòu)中的蒽環(huán)具有疏水性，因此K5-DOX可表現(xiàn)出兩親性，在水溶液中可通過(guò)疏水作用力自組裝形成納米粒子。透射電鏡結(jié)果表明，形成的納米粒子為邊緣模糊的球狀納米粒子，并且具有良好的分散性、尺度均一，平均粒徑約為40nm，如圖3所示。納米粒子的粒徑大小影響其微粒的分散穩(wěn)定性以及在體內(nèi)的分布，，K5-DOX納米粒子的粒徑通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)進(jìn)行測(cè)定，如圖4所示。從結(jié)果中可以看出，K5-DOX在水溶液中組裝得到的納米粒子的平均粒徑為180．4nm，PDI=0.174，表明其具有較窄的粒徑分布。粒徑?

形成的納米粒子為邊緣模糊的球狀納米粒子，并且具有良好的分散性、尺度均一，平均粒徑約為40nm，如圖3所示。納米粒子的粒徑大小影響其微粒的分散穩(wěn)定性以及在體內(nèi)的分布，K5-DOX納米粒子的粒徑通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)進(jìn)行測(cè)定，如圖4所示。從結(jié)果中可以看出，K5-DOX在水溶液中組裝得到的納米粒子的平均粒徑為180．4nm，PDI=0.174，表明其具有較窄的粒徑分布。粒徑儀所測(cè)納米粒子在水溶液中的粒徑大于透射電鏡測(cè)得的粒徑，這可能是透射電鏡樣品制備過(guò)程中納米粒子干燥導(dǎo)致納米粒子表面親水層塌陷和納米粒子皺縮所致。圖3K5-DOX納米粒子的透射電鏡圖
【作者單位】： 江南大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：教育部博士點(diǎn)基金(20110093110008) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK2012557) 武漢大學(xué)生物醫(yī)用高分子材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金(20110401)
【分類(lèi)號(hào)】：R979.1

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本文編號(hào)：2551422