【摘要】：白細(xì)胞介素-2在人體免疫應(yīng)答中具有重要作用,常用于治療腫瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多種疾病,但因其體內(nèi)半衰期短而限制了其臨床應(yīng)用。文中構(gòu)建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3質(zhì)粒,并通過電轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)入中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary cell,CHO細(xì)胞)中,利用p MH3質(zhì)粒所攜帶的neo基因進(jìn)行篩選,經(jīng)96孔板培養(yǎng)并篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白質(zhì)的重組細(xì)胞,融合蛋白HSA-IL-2表達(dá)量達(dá)到2.26 mg/L。利用反轉(zhuǎn)錄PCR和Western blot對重組細(xì)胞鑒定后發(fā)現(xiàn),融合蛋白編碼基因整合入重組CHO細(xì)胞基因組中,而且融合蛋白同時具有HSA和IL-2雙重免疫原性。利用對IL-2具有依賴性的CTLL-2細(xì)胞進(jìn)行活性分析后發(fā)現(xiàn),篩選得到的表達(dá)細(xì)胞分泌得到的融合蛋白具有較高的生物活性,表明成功構(gòu)建具有表達(dá)IL-2生物活性能力的CHO細(xì)胞。
[Abstract]:......
【作者單位】： 江南大學(xué)工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室;江南大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：國家863計劃項目(2014AA021003) 中科院先導(dǎo)計劃項目(XDA01040202) 江蘇省優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目
【分類號】：Q78;R91

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本文編號：2472208