發(fā)布時(shí)間：2018-12-13 07:53

【摘要】：全球癌癥發(fā)病率居高不下,癌癥作為一種惡性疾病嚴(yán)重威脅著人類健康。作為如今腫瘤的主要治療方法之一的化療法,其治療效果受到腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥作用的限制。因此,開發(fā)抗癌活性高,并且能夠抗癌細(xì)胞多藥耐藥的抗腫瘤藥物成為了抗腫瘤藥物的研究熱點(diǎn)。本課題針對(duì)Telekin的抗腫瘤多藥耐藥作用及其機(jī)制展開相關(guān)研究工作,所用到的研究對(duì)象-化合物Telekin是從天然植物金挖耳中提取的一種桉烷內(nèi)酯類化合物,在前期實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗腫瘤活性。基于前期Telekin抗腫瘤機(jī)制的研究結(jié)果,本論文發(fā)現(xiàn)其對(duì)多藥耐藥的癌細(xì)胞也有抑制作用并進(jìn)一步展開機(jī)制探討工作。我們選取了三組耐藥及其親本細(xì)胞株K562、K562/A02,KB、KB/VCR,MCF-7、MCF-7/ADR進(jìn)行藥物敏感性篩選。MTT結(jié)果顯示,Telekin對(duì)于多藥耐藥細(xì)胞具有直接的較強(qiáng)毒性,與傳統(tǒng)化療藥物長(zhǎng)春新堿,阿霉素等相比具有不受耐藥泵影響的優(yōu)勢(shì),且對(duì)K562/A02及K562細(xì)胞的藥物敏感性高于其他兩對(duì)組織來(lái)源的細(xì)胞株,對(duì)K562/A02及K562的細(xì)胞增殖抑制作用呈現(xiàn)出時(shí)間及濃度的依賴性。采用Annexin V/PI雙染法以及DAPI染色對(duì)經(jīng)Telekin處理48h后的K562/A02及K562細(xì)胞進(jìn)行調(diào)亡檢測(cè)。結(jié)果顯示,Telekin對(duì)K562/A02及K562具有都誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的作用,Western Blot對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bc1-2家族以及Caspase家族蛋白的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)后,我們發(fā)現(xiàn)在Telekin的作用下,K562/A02細(xì)胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量降低,凋亡促進(jìn)蛋白Bax表達(dá)量升高;未活化的Caspase-9和Caspase-3蛋白的表達(dá)量降低,同時(shí)其活化形式的Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3的表達(dá)量明顯增加,并呈現(xiàn)出濃度依賴性。以上結(jié)果表明,Telekin可能通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2家族及Caspase家族蛋白表達(dá),誘導(dǎo)K562/A02細(xì)胞凋亡。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,我們主要對(duì)Telekin抗多藥耐藥的作用機(jī)制進(jìn)行相關(guān)研究。由于P-gp泵對(duì)藥物的外排被認(rèn)為是引起腫瘤細(xì)胞多藥耐藥作用的主要因素之一。我們首先采用Rhl23及阿霉素在細(xì)胞內(nèi)的累積實(shí)驗(yàn)對(duì)Telekin處理的K562/A02細(xì)胞中的P-gp進(jìn)行探究。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果說(shuō)明,經(jīng)非毒性劑量Telekin處理的K562/A02細(xì)胞內(nèi)的Rhl23及阿霉素積累量無(wú)明顯增加,Telekin(10 μmol/L,20μmol/L)處理的K562/A02細(xì)胞內(nèi)Rhl23及阿霉素累積量有明顯增加。由此,我們推測(cè),Telekin可能不是通過(guò)增加化療藥物的細(xì)胞內(nèi)含量,而是直接誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡,由于在毒性劑量下Telekin抑制耐藥細(xì)胞中P-gp蛋白的表達(dá),從而引起P-gp泵功能的下調(diào)。進(jìn)而,我們對(duì)Telekin抑制P-gp轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)做進(jìn)一步的探討。我們用流式細(xì)胞儀,Western Blot及實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)P-gp蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)不同濃度Telekin處理的K562/A02細(xì)胞中P-gp的蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平均明顯降低,且呈現(xiàn)出濃度依賴性。我們也針對(duì)Telekin對(duì)另外兩種與多藥耐藥相關(guān)的蛋白MRP-1以及ABCG2的影響進(jìn)行了探究。由于ABCG2在乳腺癌耐藥細(xì)胞株中呈現(xiàn)高表達(dá),故我們選用人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/A及其親本細(xì)胞株MCF-7,針對(duì)Telekin對(duì)細(xì)胞中ABCG2的作用進(jìn)行研究。流式細(xì)胞儀和實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,Telekin能夠抑制K562/A02細(xì)胞中MRP-1蛋白的表達(dá)量以及其轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá),并呈現(xiàn)濃度依賴性。米托蒽醌累積實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)高濃度(20 μmol/L)Telekin處理的MCF-7/A細(xì)胞內(nèi)米托蒽醌的累積量顯著增加,并呈現(xiàn)出濃度依賴性。我們進(jìn)一步對(duì)ABCG2蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。Western Blot以及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,經(jīng)不同濃度Telekin處理的MCF-7/A細(xì)胞中ABCG2的蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平均明顯降低,且呈現(xiàn)出濃度依賴性。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們推測(cè),Telekin也抑制耐藥細(xì)胞中MRP-1及ABCG2蛋白水平及轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。由于P-gp的編碼基因MDR1啟動(dòng)子核心區(qū)域存在能夠與NF-κB相結(jié)合的特異性區(qū)域,ABCG2的啟動(dòng)子能夠與NF-κB的p50亞基結(jié)合。NF-κB通路的活化能夠上調(diào)P-gp及ABCG2蛋白的表達(dá),最終引起腫瘤細(xì)胞多藥耐藥作用,故我們主要針對(duì)AKT/NF-κB信號(hào)通路對(duì)P-gp及ABCG2蛋白表達(dá)的調(diào)控進(jìn)行了進(jìn)一步探究。Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明,在Telekin處理的K562/A02及MCF-7/A細(xì)胞中phospho-AKT與NF-κB表達(dá)量明顯降低,I-κB的表達(dá)量升高。Telekin能夠通過(guò)調(diào)節(jié)AKT/NF-κB信號(hào)通路,并且對(duì)其細(xì)胞中高表達(dá)的多藥耐藥作用相關(guān)蛋白P-gp、ABCG2的表達(dá)具有抑制作用。綜上所述,Telekin能夠繞過(guò)多藥耐藥細(xì)胞中P-gp耐藥泵的作用,并下調(diào)多種多藥耐藥泵的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)直接誘導(dǎo)多藥耐藥細(xì)胞凋亡,是一個(gè)具有發(fā)展?jié)摿Φ目鼓[瘤多藥耐藥的天然產(chǎn)物,我們的研究也為其今后的進(jìn)一步開發(fā)與臨床應(yīng)用提供了有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 夏靖,于冬青,易永芬;多藥耐藥相關(guān)蛋白及其介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥[J];山東生物醫(yī)學(xué)工程;2001年01期

2 ;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥[J];中國(guó)腫瘤;2002年11期

3 陳敏妹;腫瘤多藥耐藥及其逆轉(zhuǎn)研究現(xiàn)狀[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2003年12期

4 羅克樞,黃曉赤;惡性腫瘤多藥耐藥標(biāo)記的檢測(cè)及其臨床意義[J];成都醫(yī)藥;2004年02期

5 馮繼鋒;;克服腫瘤多藥耐藥難題[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2005年11期

6 劉蘊(yùn)光;;惡性腫瘤多藥耐藥研究進(jìn)展[J];中國(guó)自然醫(yī)學(xué)雜志;2006年04期

7 潘光棟;嚴(yán)律南;;腫瘤多藥耐藥形成機(jī)制研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年08期

8 董會(huì)月;蘇穎;;腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)藥物的研究進(jìn)展[J];藥物流行病學(xué)雜志;2010年02期

9 劉嘉;;腫瘤多藥耐藥機(jī)制及其逆轉(zhuǎn)方案的研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤外科雜志;2010年03期

10 平寶紅,孟凡義;腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)研究現(xiàn)狀[J];白血病;2000年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 高建凱;李勇莉;張敏;王國(guó)棟;高福蓮;;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的探索[A];2008年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2008年

2 仇笳熙;陳靜波;張洪彬;卿晨;;化合物G逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥及機(jī)制研究[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2009年

3 浦龍健;劉浩;蔣琛琛;;腫瘤多藥耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)策略的研究進(jìn)展[A];促進(jìn)科技經(jīng)濟(jì)結(jié)合，服務(wù)創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)發(fā)展——蚌埠市科協(xié)2012年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

4 郗紅娟;靳嵐;王鳳山;郭學(xué)平;;透明質(zhì)酸寡糖與腫瘤多藥耐藥相關(guān)性的研究進(jìn)展[A];山東省藥學(xué)會(huì)2010年生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

5 翟寶進(jìn);邵澤勇;伍烽;王智彪;;超聲波逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[A];慶祝中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)成立20周年——第八屆全國(guó)超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 戴均貴;曲潤(rùn)江;鄒建華;陳曉光;果德安;;紫杉烷類化合物的化學(xué)酶法轉(zhuǎn)化及其腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)活性評(píng)價(jià)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第二十五屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集（下冊(cè)）[C];2006年

7 劉耕陶;;五味子逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用及其機(jī)制[A];2007醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

8 仇笳熙;陳靜波;張洪彬;卿晨;;新四環(huán)二萜類化合物G逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥及機(jī)制的研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

9 萬(wàn)升標(biāo);周明祥;;天然多酚產(chǎn)物結(jié)構(gòu)改造及其抗腫瘤多藥耐藥活性研究(英文)[A];2011年全國(guó)藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

10 韓淑燕;李萍萍;;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的研究進(jìn)展[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會(huì)論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 陳漢橋;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥有新發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

2 上海長(zhǎng)海醫(yī)院中醫(yī)科 蘇永華 副主任醫(yī)師;防治化療中易出現(xiàn)的腫瘤多藥耐藥(上)[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2010年

3 論壇;中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥有新發(fā)現(xiàn)[N];北京科技報(bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 翟寶進(jìn);超聲波逆轉(zhuǎn)人腫瘤多藥耐藥的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

2 吳靜;用于逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的納米藥物載體的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

3 干惠珠;基因沉默技術(shù)(RNAi)沉默腫瘤多藥耐藥基因的研究[D];吉林大學(xué);2005年

4 朱恒銳;腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)小分子H6和Mogrol的發(fā)現(xiàn)與作用機(jī)制探討[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

5 黃豐;腫瘤多藥耐藥細(xì)胞基因表達(dá)譜和人細(xì)胞色素氧化酶CYP2C19檢測(cè)芯片的初步研究和應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2002年

6 張戰(zhàn)民;低頻率超聲治療實(shí)體腫瘤的臨床研究及低頻率超聲和敏藥堿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的體外研究[D];吉林大學(xué);2006年

7 何丹;p38抑制劑BIRB796逆轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCB1介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥作用及其機(jī)制研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

8 劉培民;中藥RHU抽提劑逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥及誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2003年

9 許東航;阿霉素納米制劑克服腫瘤多藥耐藥作用的研究[D];浙江大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 萬(wàn)培紅;基于P-gp靶點(diǎn)天然小分子化合物DHA和SM抗腫瘤多藥耐藥作用及其機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 李福星;甲基化兒茶素衍生物的設(shè)計(jì)合成及抗腫瘤多藥耐藥活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2015年

3 吳迪;基于腫瘤多藥耐藥機(jī)制構(gòu)建多孔微球和苯硼酸靶向型小核酸遞釋體系的研究[D];吉林大學(xué);2016年

4 袁瑋琪;馬利筋新型C_(21)甾體化合物Asclepiasterol逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥的作用及機(jī)制研究[D];暨南大學(xué);2016年

5 褚文希;徐長(zhǎng)卿逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];青島大學(xué);2016年

6 李玲s，

本文編號(hào)：2376189