【摘要】：目的通過升高眼內(nèi)壓法建立兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷（retinal ischemia-reperfusion injury RIRI）模型，耳緣靜脈給予奧扎格雷鈉，利用HE染色，免疫組織化學(xué)染色檢測視網(wǎng)膜Caspase-3及Bcl-2表達的變化以及TUNEL法檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡的表達，探討奧扎格雷鈉對兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護作用及對Caspase-3及Bcl-2表達的影響，為臨床中視網(wǎng)膜缺血性損傷提供理論依據(jù)。 方法選用健康雄性日本純種大耳白兔78只，體重2.0～2.5kg，隨機分3組：正常組（6只），單純?nèi)毖俟嘧⒔M（IR36只），奧扎格雷鈉注射治療組（36只）。后兩組又分為6h、12h、24h、48h、72h、120h組（每組6只）。正常組，不做任何處理；IR組通過升壓裝置提高前房眼壓制備缺血再灌注模型，不再給予其他措施；（奧扎格雷鈉+IR）治療組在缺血再灌注損傷后立即耳緣靜脈注射奧扎格雷鈉，25mg/kg，1次/d。正常組和損傷組注射等劑量的平衡鹽溶液。各組分別于再灌注后6h、12h、24h、48h、72h、120h經(jīng)耳緣靜脈注射空氣10ml栓塞處死家兔，立即摘取缺血再灌注的眼球。對不同時間段的視網(wǎng)膜組織分別通過HE染色法觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化，通過免疫組化法檢測凋亡基因Caspase-3、Bcl-2蛋白表達的變化和通過TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡的變化，所得結(jié)果進行圖像分析，將數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。 結(jié)果1HE染色視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化：正常組視網(wǎng)膜組織層次清晰，神經(jīng)節(jié)細胞呈單層密集排列，細胞體積較大。IR組神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目較正常組減少，隨時間推遲視網(wǎng)膜水腫加劇，各層細胞排列稍疏松，空泡樣變，再灌注72h視網(wǎng)膜水腫減輕，節(jié)細胞數(shù)目減少，120h視網(wǎng)膜水腫消失，但整個視網(wǎng)膜變薄。奧扎格雷鈉注射治療組神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)減少程度、各層細胞損害程度均較IR組有所減輕。2免疫組織化學(xué)染色法檢測Caspase-3、Bcl-2蛋白表達的變化：正常組中沒有Caspase-3、Bcl-2蛋白陽性細胞，再灌注6h后陽性表達增多，主要位于神經(jīng)節(jié)細胞層；再灌注12h時表達增多；再灌注24h陽性表達至高峰，主要位于神經(jīng)節(jié)細胞層，內(nèi)核層也有少量表達，外核層未見表達；再灌注48h后陽性表達逐漸下降，主要位于神經(jīng)節(jié)細胞層；再灌注72h時可見少量表達；至再灌注120h視網(wǎng)膜基本無陽性細胞表達。治療組各觀察指標(biāo)變化趨勢基本與損傷組相似。相同時間點治療組與損傷組比較，Bcl-2表達明顯增強（除120h組），Caspase-3表達明顯減弱（P＜0.05）。損傷組內(nèi)與治療組內(nèi)不同時間點之間陽性細胞計數(shù)差異顯著（P＜0.01）。3TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡的變化：正常組中沒有凋亡細胞的陽性表達，再灌注6h凋亡細胞出現(xiàn)少量表達，12h凋亡細胞陽性表達明顯增多；24h凋亡細胞陽性表達達到高峰，主要位于神經(jīng)節(jié)細胞層與內(nèi)核層；48h凋亡細胞表達開始下降，72h凋亡細胞陽性表達明顯減少；120h未見明顯表達。治療組凋亡細胞陽性表達趨勢基本同損傷組，但表達量明顯減少。損傷組與治療組間同一時間點比較，12h、24h、48h、72h組凋亡細胞計數(shù)結(jié)果差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.01），6h、120h組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。損傷組內(nèi)與治療組內(nèi)不同時間點之間凋亡細胞計數(shù)差異顯著（P＜0.01）。 結(jié)論奧扎格雷鈉對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞具有明顯的保護作用，其可通過下調(diào)Caspase-3蛋白及增加Bcl-2蛋白的表達，，從而達到抑制RIRI時視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的凋亡。
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【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2373138