【摘要】：本文建立了一種運(yùn)用近紅外光譜法（near infrared spectroscopy，NIRS）結(jié)合偏最小二乘法（partial least squares，PLS）高通量、高選擇性測(cè)定還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）片中雜質(zhì)氧化型谷胱甘肽（oxidizedglutathione，GSSG）及片劑抗張強(qiáng)度（radial tensilestrength，RTS）的方法。為了建立和評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)模型，采用優(yōu)化的測(cè)量參數(shù)，準(zhǔn)確測(cè)量了330片還原型谷胱甘肽片的近紅外漫反射和透射光譜。在GSSG或RTS的分析過(guò)程中，進(jìn)行了近紅外漫反射光譜（nearinfrared diffuse reflectance spectrum，NIR-DRS）和近紅外透射光譜（nearinfrared transmittance spectrum，NIR-TS）的篩選，校正集和預(yù)測(cè)集的合理篩分，采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常光譜后，用最佳的主因子數(shù)建立模型。用校正集均方根誤差（root mean square error of calibration，RMSEC）、交叉驗(yàn)證均方根誤差（root mean square error of cross validation，RMSECV）、預(yù)測(cè)集均方根誤差（root mean square error of prediction，RMSEP）、校正集的相關(guān)系數(shù)（correlation coefficient of calibration，Rc）和預(yù)測(cè)集的相關(guān)系數(shù)（correlation coefficient of prediction，Rp）對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，所建立的近紅外分析模型性能優(yōu)良。因此可證明NIRS結(jié)合PLS可同時(shí)地、選擇性地、快速無(wú)損地分析還原型谷胱甘肽片中的雜質(zhì)GSSG的含量和片劑物理參數(shù)RTS，盡管片劑中主藥GSH的含量非常高，而雜質(zhì)GSSG的含量很低。此策略可作為對(duì)常用的藥物制劑中主要成分的近紅外光譜法在線分析的一個(gè)重要補(bǔ)充，同時(shí)也擴(kuò)展了近紅外光譜法在高通量和高選擇性分析方向的運(yùn)用。 目的： 1.建立還原型谷胱甘肽片中主要雜質(zhì)GSSG含量的NIR-DRS快速測(cè)定法，用于質(zhì)量控制。 2.建立還原型谷胱甘肽片物理參數(shù)RTS的NIR-DRS快速測(cè)定法，用于質(zhì)量控制。 方法： 1.還原型谷胱甘肽片近紅外光譜的測(cè)量 將片劑一面放置于FT-NIR光譜儀的積分球附件檢測(cè)窗，用片劑漫透射采樣附件調(diào)節(jié)片劑位置使固定于檢測(cè)窗中心，同時(shí)采集樣品的NIR-DRS和NIR-TS。然后，采用同樣的方式對(duì)片劑另一面進(jìn)行光譜測(cè)量。所有的光譜測(cè)量均采用下述測(cè)量條件。分辨率：8cm-1；掃描次數(shù)：64；掃描范圍：漫反射光譜10000 4000cm-1，透射光譜10000 6000cm-1；溫度：約25；濕度：（55±5）%RH。每次測(cè)量前掃描并扣除背景以避免空氣中水蒸氣和二氧化碳的影響。 2.還原型谷胱甘肽片中GSSG含量參考值的測(cè)定 用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定，并按外標(biāo)法計(jì)算GSSG的含量參考值。色譜柱：C18柱（Phenomenex Gemini,250mm4.6mm,5μm），柱溫：30，流動(dòng)相：甲醇-緩沖液（10mmol/L庚烷磺酸鈉水溶液，50mmol/L磷酸二氫鈉水溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）（4:96, v/v），流速：1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，進(jìn)樣量：20μL。根據(jù)ICH-Q2(R1)中分析方法的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。 3.還原型谷胱甘肽片RTS參考值的測(cè)定 用游標(biāo)卡尺測(cè)量每片樣品的直徑（t）和厚度（D），用片劑硬度測(cè)試儀測(cè)定每片樣品的硬度（F），然后根據(jù)公式（1）計(jì)算每片樣品的RTS參考值。(1) 4.建立基于NIR-DRS的GSSG含量的PLS預(yù)測(cè)模型并對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證 對(duì)NIR-DRS和NIR-TS進(jìn)行選擇，然后合理的篩分校正集和預(yù)測(cè)集，采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常光譜后，用最佳的主因子數(shù)建立基于NIR-DRS的GSSG預(yù)測(cè)模型。用RMSEC、RMSECV、RMSEP、Rc和Rp對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。 5.建立基于NIR-DRS的RTS的PLS預(yù)測(cè)模型并對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證 對(duì)NIR-DRS和NIR-TS進(jìn)行選擇，然后合理的篩分校正集和預(yù)測(cè)集，采用化學(xué)計(jì)量學(xué)技術(shù)對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理。在選擇了建模光譜范圍和去除異常光譜后，用最佳的主因子數(shù)建立基于NIR-DRS的RTS預(yù)測(cè)模型。用RMSEC、RMSECV、RMSEP、Rc和Rp對(duì)所建模型的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。 結(jié)果： 1.近紅外光譜的測(cè)量 得到330片還原型谷胱甘肽片樣品的660張NIR-DRS和660張NIR-TS。 2.氧化型谷胱甘肽含量參考值的測(cè)定 GSH和GSSG的分離度符合要求。GSSG的濃度（0.44 16.34μg/mL）和峰面積之間呈良好的線性關(guān)系，回歸方程A=16.85C-0.823（A為對(duì)照品峰面積，C對(duì)照品濃度）R2=1。平均回收率為100.3%（n=9），RSD為1.3%。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，HPLC可準(zhǔn)確測(cè)定GSSG的含量。 測(cè)得186個(gè)還原型谷胱甘肽片樣品的GSSG含量參考值范圍為15.81 22.20mg/g。 3.抗張強(qiáng)度參考值的測(cè)定 測(cè)得318個(gè)還原型谷胱甘肽片樣品的RTS參考值范圍為270.76 1145.14kPa。 4. GSSG預(yù)測(cè)模型性能評(píng)價(jià) 最優(yōu)的GSSG預(yù)模型中，RMSEC、RMSECV和RMSEP分別為0.575、0.729和0.607mg/g，Rc和Rp分別為0.9173和0.9182。預(yù)測(cè)集參考值和預(yù)測(cè)值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程y=0.8614x+2.6982。 5. RTS預(yù)測(cè)模型性能評(píng)價(jià) 最優(yōu)的RTS預(yù)測(cè)模型中，RMSEC、RMSECV和RMSEP分別為58.2、61.3和69.0kPa，Rc和Rp分別0.9393和0.9151。預(yù)測(cè)集參考值和預(yù)測(cè)值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程y=0.8211x+113.3224。 結(jié)論： 所建方法可高通量無(wú)損快速地測(cè)定還原型谷胱甘肽片中主要雜質(zhì)GSSG的含量和片劑的RTS。所建模型具有低的預(yù)測(cè)誤差，，以及較高的相關(guān)系數(shù)。表明NIR-DRS結(jié)合PLS可高通量選擇性的測(cè)定還原型谷胱甘肽片中低含量的GSSG和片劑的物理參數(shù)RTS。此策略亦可用于片劑生產(chǎn)過(guò)程的在線監(jiān)控。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R917

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2371664