【摘要】：目的探討全反式維A酸(atRA)對小鼠胚胎腭間充質(zhì)細胞(MEPM)成骨分化的影響及其機制。方法分離培養(yǎng)MEPM細胞,在成骨誘導(OM)培養(yǎng)基中分別加入atRA 0.1和1.0μmol·L-1,分別于培養(yǎng)1,3,5,7和9 d用MTT法測定細胞存活率,化學比色法檢測堿性磷酸酶(ALP)活性。培養(yǎng)21 d后,Von-Kossa染色觀察礦化面積比。培養(yǎng)9 d后,逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測成骨相關(guān)基因Runx2、骨橋蛋白以及骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體(Bmpr)1b,Bmpr2和Smad5 mRNA的表達水平。結(jié)果培養(yǎng)9 d后,與正常對照組相比,OM及OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1組細胞存活率明顯降低(P0.05);OM組細胞ALP活性最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1組ALP活性明顯低于OM組(P0.05)。培養(yǎng)21 d后,Von-Kossa染色結(jié)果顯示,OM+atRA 1μmol·L-1組礦化結(jié)節(jié)面積比為(3.56±1.24)%,明顯低于OM組(10.33±2.29)%(P0.05)。培養(yǎng)9 d后,OM組的Runx2相對表達各組內(nèi)最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1組與其相比約下調(diào)20%(P0.05)。與正常對照組相比,OM組、OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1組骨橋蛋白mRNA表達明顯升高(P0.05)。OM組的Bmpr1b mRNA表達水平為正常對照組的1.6倍,OM+atRA 1.0μmol·L-1組的相對表達僅為OM組的33%(P0.05)。OM+atRA 1.0μmol·L-1組Smad5 mRNA的表達水平明顯低于OM組(P0.05)。結(jié)論atRA能抑制MEPM的成骨分化,其作用機制可能與其下調(diào)Bmpr1b影響B(tài)MPR信號有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of all-trans retinoic acid (atRA) on (MEPM) osteogenesis of mouse embryonic palate mesenchymal cells. Methods MEPM cells were isolated and cultured. AtRA 0.1 and 1.0 渭 mol L -1 were added to the osteoblast inducing (OM) medium, respectively. The survival rate of the cells was measured by MTT method on the 7th and 9th day of culture. Alkaline phosphatase (ALP) activity was detected by chemical colorimetry. The mineralized area ratio was observed by Von-Kossa staining after 21 days of culture. After culture for 9 days, the expression of osteogenic related gene Runx2, osteopontin and bone morphogenetic protein receptor (Bmpr) 1bmpr2 and Smad5 mRNA were detected by reverse transcription PCR (RT-PCR). Results after 9 days of culture, the survival rate of OM and OM atRA 0.1 and 1.0 渭 mol L-1 groups was significantly lower than that of normal control group (P0.05). The highest ALP activity in OM group was significantly lower than that in OM group (P0.05). After 21 days of culture, Von-Kossa staining showed that the area ratio of mineralized nodules in, OM atRA 1 渭 mol L-1 group was (3.56 鹵1.24)%, which was significantly lower than that in OM group (10.33 鹵2.29)% (P0.05). After 9 days of culture, the relative expression of Runx2 in OM group was decreased by about 20% (P0.05) compared with the highest, OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group. Compared with the normal control group, the expression of osteopontin mRNA in the OM group was significantly higher than that in the, OM atRA 0.1 and 1.0 渭 mol L-1 group (P0.05). The Bmpr1b mRNA expression level in the). OM group was 1.6-fold higher than that in the normal control group. The relative expression of Smad5 mRNA in the OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group was only 33% of that in the OM group (P0.05). The Smad5 mRNA expression level in the). OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group was significantly lower than that in the OM group (P0.05). Conclusion atRA can inhibit the osteogenic differentiation of MEPM, and its mechanism may be related to the down-regulation of Bmpr1b on BMPR signal.
【作者單位】： 廣東醫(yī)學院附屬南山醫(yī)院口腔科;中山大學附屬口腔醫(yī)院;中山大學口腔醫(yī)學研究所;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81300862) 深圳市醫(yī)療衛(wèi)生類科研項目(201302202) 深圳市南山區(qū)衛(wèi)生科技項目(2012040)~~
【分類號】：R96

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6 彭U，

本文編號：2345872