發(fā)布時間：2018-11-17 20:25

【摘要】：目的二甲基甲酰胺（DMF）是一種應用極其廣泛的萬能有機溶劑，在各個制造行業(yè)大量使用，其對職業(yè)接觸人群健康影響也越來越大。目前研究較為深入的是DMF對肝臟的損傷而其對心臟損害的研究十分罕見，，僅見于少量臨床病例報告中。課題組在前期的現(xiàn)場衛(wèi)生學調(diào)查中發(fā)現(xiàn)DMF職業(yè)接觸者有明顯的心電圖異常和心律不齊表現(xiàn)，動物染毒實驗中也發(fā)現(xiàn)DMF會致使心肌細胞發(fā)生病變壞死及產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化等改變。為了研究DMF對心肌產(chǎn)生損害的機制，本實驗采用了全細胞膜片鉗技術記錄不同劑量的DMF作用后H9C2心肌細胞的L-型鈣電流通路變化，研究DMF對心肌細胞造成的電生理改變，初步探討DMF對心肌的毒性作用機制。 材料和方法實驗用心肌細胞系購于中科院上海細胞庫，為正常大鼠心肌細胞系（H9C2），實驗室培養(yǎng)細胞處于對數(shù)生長期時，消化并置于玻片上（細胞密度約為l105/ml），待2h后細胞完全貼壁加入含有10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液，在5％CO2、37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后用含有不同劑量DMF的新鮮培養(yǎng)液再次培養(yǎng)心肌細胞24h，用PBS緩沖液清洗三次后置于細胞外液中用于膜片鉗實驗。保持實驗環(huán)境在25oC左右，鏡下選擇貼壁良好、邊緣清晰、折光性良好的單個細胞進行實驗。微電極采用兩步法拉制而成，充灌電極內(nèi)液后阻值在2-5M。微電極經(jīng)電極夾持器與注射器相連，給正壓后浸入電極外液接觸心肌細胞，使用注射器給予負壓形成高阻封接，繼續(xù)施加負壓吸破細胞膜，形成全細胞記錄模式。在電壓鉗模式下，記錄低劑量組（140mM DMF染毒組）、高劑量組（220mMDMF染毒組）的L-型鈣電流的變化，并與正常心肌細胞對照組進行比較。鈣電流的記錄和刺激程序均由PatchMaster軟件完成，輸出信號經(jīng)HEKA EPC10USB放大器放大。記錄的信號經(jīng)放大保存后，用配套的FitMaster分析軟件進行處理，再經(jīng)相應分析模塊得出相應的圖形和數(shù)據(jù)。組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，數(shù)據(jù)處理使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件完成。 結(jié)果經(jīng)過具體分析后發(fā)現(xiàn)三個實驗組的I-V曲線均在+20mV左右達到峰值，心肌細胞的L-型鈣電流的I-V曲線的形狀并沒有明顯改變，表明鈣電流的電壓依賴性沒有改變，但是隨著DMF的作用劑量增大，I-V曲線不斷上移，心肌細胞L-型鈣電流不斷減小。峰值電流密度比較顯示：對照組的平均峰值電流密度為-9.50±0.44pA/pF（n=10），低劑量組（140mM DMF）的平均峰值電流密度為-4.43±0.46pA/pF（n=10），峰值電流密度下降了53.37%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。高劑量組（220mM DMF）的平均峰值電流密度為-2.37±0.23pA/pF（n=10），相比較于對照組下降了75.05%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。高劑量組（220mMDMF）的平均峰值電流密度較低劑量組（140mM DMF）的平均峰值電流密度下降了46.50%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論DMF干預后，H9C2心肌細胞發(fā)生了一系列的電生理學方面的變化，L-型鈣電流峰值平均電流密度隨著DMF作用劑量的增加而降低呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關系，并提示DMF引起的心電圖異常和心律不齊等改變可能與其以電壓依賴方式抑制了心肌細胞膜上的L-型鈣離子通道電流，使鈣離子內(nèi)流減少有關。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：2338950